【原创】有关使用脂质体转染SiRNA后24小时内追加培养基问题的讨论
脂质体(这里我用的是lipofectamine2000, invitrogen)转染SiRNA后24小时内追加培养基问题, 似乎有比较大的分歧，主要有以下这么三种说法：1、 不追加 2、 4-6小时追加 3、 24小时追加。 这里涉及的相关考虑因素主要包括以下几个方面： 1、由于转染时用的是无血清无抗生素培养基，细胞处于“血清饥饿”状态，细胞生长状态受到影响，需要给与含血清培养基加以矫正。 2、脂质体本身有毒性，也对细胞状态产生影响，加血清培养基有利于改善状态。 3、增加培养基有可能影响体系的转染活性和效率。4、如追加含抗生素的培养基，可能对细胞存在毒性作用。5、追加培养基时，增加的操作步骤、追加的培养基都有可能成为转染体系的污染源，导致实验失败。似乎实际中大家常用的做法是4-6小时追加，而lipofectamine2000和Ambion SiRNA试剂盒的说明上均说无追加的必要，也就是最好不追加，但lipo上又说4-6小时追加也不致影响转染活性，Ambion则说24小时追加有可能会增加细胞的存活几率。
再说说我的试验情况： 我采用24小时追加等体积含血清和抗生素的1640，24小时和48小时镜下观察细胞状态均良好，考虑可能血清还是对细胞的存活是有帮助的，24小时追加又避免了过早追加时，抗生素对细胞的毒性作用（Ambion好像说最好72小时内都让转染体系处于无抗生素状态，究竟合理与否，待查）。
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[[i] 本帖最后由 ted_sun 于 2008-7-28 14:52 编辑 [/i]] [size=4] [color=blue] 多多发些原创,奖励多多^_^,也欢迎各位兄弟向cdsora多多请教,也有奖励!![/color][/size]
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