ELISA技术平台的几个关键步骤
1：包被和封闭：包被抗原量与实验的敏感性特异性有关系，同时封闭方法也决定板子的有效期。良好的封闭方法可使板子存放一年以上；2：HRP标记物：HRP标记物往往是试剂盒的生命中枢。不仅仅HRP需要做保护，而且标记抗体，或者抗原的活性保护也非常重要。因此，应该选择良好的保护措施；
3：显色液：显色液的稳定性直接关系到实验结果。如果显色液在试验前就已经有颜色，那么阴性对照一定高。显色液的品质，往往决定着试剂盒的整个品质。目前多用双管显色液。单管显色液已经在普及。[url]http://www.microbiology-sd.cn[/url] 不知道都用些什么来进行封闭呢 Elisa中封闭的方法有：1％BSA、5～10％的小牛血清、1～10％的脱脂奶粉，封闭效果的好坏是要靠摸索的，封闭的好空白对照OD值低，非特异性吸附少。若是自己配制小牛血清的话，第一天配的小牛血清，第二天即不能用了，即使放4度冰箱过认夜也不行，有时对结果影响很大。
我也加几条注意点：
蛋白样品保存时不能用叠氮钠，它能影响HRP酶的活性，使结果偏低。
测量OD值时时间准确，有的底物在30分钟后显色变浅。
洗涤液中加入了表面活性剂，起泡较多，拍板时应不留泡沫，有的人因此而用蒸留水代替，其实蒸留水对HRP活性是有损的，会使结果偏低。
当然37度孵育时都应在湿盒中，并且避光。这样保证湿度，以及显色时光线对底物的分解。
如果是定量，那么加样应当准确，试剂都加在底部，无沾在口部的，避免气泡的产生。 [s:44] [s:44] [s:44] [s:44]
谢谢 试剂的保存都用什么呢 37度孵育时恒温干燥箱可以吗
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