[精华讨论帖]药物TLC实践技术讨论--交流才会进步，请分享大家的经验，奖励原创！
[color=darkblue][size=5]我先来一个：[/size][/color]手工铺板是非常考验你的耐力的事情，最好是找实验室的GGJJMMDD们一起，一来速度快，二来大家仪器交流心得。
我认为，第一个关键的地方，你的CMC-Na溶液必须配制的好，放置的也要很好，完全分层之后只能取上清液。上清液要澄清透明，时间太长的CMC-Na可能会发黄，如果有霉菌出现的话，绝对不能使用。
第二就是硅胶和CMC-Na溶液的比例可以适当的调节，根据你所需要薄层板的软硬来微调。可以一个人研磨，一个人缓慢的倒CMC-Na溶液。研磨时最能考验你的定力，我觉得你该找女生来磨，但是那种太文弱的不行。研磨时要顺着一个方向，速度不宜快，要顺着研钵的边缘，观察仔细，一定要把气泡赶尽杀绝。研磨好的因改是均匀的，没有气泡，没有固体的粉末类异物，溶液有一定的粘性。
最后，铺板，我觉得是各人各喜欢，可以顺着板中间倒，也可以顺着某个边缘倒，倒时也要注意不能引入小气泡。可以用玻璃棒引着溶液平铺在玻璃板上（顺便说一句，玻璃板应该很干净，没有划痕，没有缺口，4个角要“健全”），如有需要，可以双手10个指头拖住玻璃板，有节奏的颠，使得硅胶分摊匀称。尤其是4个角，容易高出玻璃板其他部位，所以要格外注意。颠好的板，表面看上去要光滑平整，没有气孔。
铺好的板，要找个干净的地方放置晾干，这个过程也是耐心的等着它，请勿打扰！
自然晾干后，活化一下（105摄氏度40分钟左右），置于密封的干燥器保存。
最后想说一下，如果你铺板目的是座分析用的话，肯定得很仔细用心。如果仅是天然药化那种粗略检查过柱子得到的馏分纯度，那就没有必要这么复杂了，也就是说速度可以快点，板的要求也没有必要这么高！
自己多看看人家怎么铺的，练练手，肯定就成高手了！ 我再补充两点切身体会：
（1）CMC-Na溶液煮了以后不能再用冷水兑，否则，几天以后就会变绿，起霉。
（2）如果有抽滤装置你可以直接把CMC-Na溶液滤过，就可以不必等它沉淀再取上清液了（嘿嘿，我是急性子），还有两个好处一是节省CMC-Na溶液，二是倒滤过的CMC-Na溶液的时候不必担心会把下层的不溶物倒出来了！ [b][size=4]再来一点体会：[/size][/b]
1.cmc-na煮沸大概30分钟或更久的，其实这个过程很慢。千分之3。过滤一下，抽滤最好。要放冷。
2.充分磨好硅胶，后，再边磨边加1。
3.板要绝对干净！！！有个边角坏一点点也可以。铺的时候，如果慢且多，那么有时会干了，你还要边磨边放点1.
4.用手颠的过程考验你的平衡，其实也容易。
5.放置---活化----干燥存放。 1. 研磨的时候确实需要沿一个方向研，不要敷衍。
2. 边缘坏一点可以用刀子刮去整齐的一条。
3. 实在怕有气泡，可以超声一下。 分享一点我的个人经验：
我是按照中国药典2000年版附录VB的操作方法，将吸附剂制备好后，直接将适量倾倒于玻板的中央处，接着用研棒轻轻将吸附剂溶液向四周摊匀，然后开始颠玻板。
颠的时候可要注意啦：一定要轻轻的颠，从玻板的一头颠到另一头，然后反过来进行。重复几次即可。
据我观察，未发现敌情。呵呵。玻板平整度很好。具体薄层展开效果，我今天就用这样的板子试试，情况如何，下回分解。 1、硅胶的浓度要适中。太稀铺板时易淌出，同时延长板的干燥时间；太稠，流动性不好，铺板是靠其流动性的，同时也很可能在没铺好前凝固。
2、硅胶研磨要充分，防止气泡。
3、铺板时，用的硅胶量要掌握好。
4、颠板。此过程要与前面步骤连续进行，且不宜久颠，以保证颠好后硅胶还有一定的流动性，放置到平台时仍可以靠自身流动修正颠板及移动所产生的不均。
5、对铺好的板要选择平整的地方，自然干燥，不易人为强制干燥。干燥后再活化，否则板会开裂。
PS：对于CMC溶液的配置，我认为最好提前几日配好，放置再用。配置时可用超声分散，对少量没有立即溶解的，放置后会逐渐消失。 有个办法过滤CMC溶液，在布氏漏斗上平铺薄薄一层脱脂棉，千万保证每个小孔都没漏掉哦！用蒸馏水润湿脱脂棉，启动真空泵，抽紧后就可以放心大胆的倒CMC溶液了，保证滤过的溶液澄清透明，而且长时间放置不沉淀。
另外有几点：
1. CMC溶液的浓度0.3-0.7%比较合适，浓度高了将来显色时如果有加热过程稍不小心板子容易发黑，浓度低了铺出来的板子不结实，轻轻一碰就掉渣，不好保存，而且点样时会很紧张，容易出洞；
2. 薄层板铺好后一定要放置在平的台面上，否则难保证板面硅胶的厚度均匀；
3. 建议硅胶应配制成偏稀的状态，这样铺制更容易，不必辛苦地颠好久，而且可多可少，可薄可厚。
用心练，会做得很好！ 我也来谈一下自己的一点经验吧。CMC-Na：硅胶为2.5：1较好，楼上师兄说的3：1应该也可以，但是硅胶配的过稀时后果很严重，板子在晾干时会出现许多裂缝，象万寿菊样的开花状，完全不能用。此乃本人的惨痛经历，当时不知道是硅胶过稀的原因，还以为冬天太冷板子给冻裂了，又作了一批放在暖气房，还是照裂不务。浪费了整整一瓶GF254啊（做的是制备板用量较大）。
有个问题至今不明白，请教各位大虾，晾干的板子放在烘箱里怎么全炸裂了，有什么方法可以避免板子炸裂。 各位说的比较全，我在此补充一些：
看分离的药物
化学药一般是作有关物质，需要一定的载药量，所以要适当增加厚度。
中药一般较难分离，需要薄板，以增加分离度。
活化
活化的目的是除去水分
厚板在活化时容易裂，考虑到化学药相对容易分离，所以降低活化温度自然晾干后，40或60摄氏度的烘箱中2～3小时即可，干燥器中保存。
用于分离中药的薄板需要活化，活化后要立即使用，可以称热点样饱和，不然空气中的水分会导致你作无用功，使得吸附色谱转为分配色谱。
硅胶和粘合剂的比例不用固定，稀点铺薄板，稠点铺厚板，以目的决定比例。
有一点不明
1. 硅胶G和硅胶H如果都加入粘合剂铺板，使得强度相同，那对分离有什么影响？
2. 如果没有影响为什么不都用硅胶G（硫酸钙能影响那类物质的分离）
3. 同样CMCNa能影响那类物质的分离？
4. 那CMCNa的浓度除了对板的硬度外还影响什么？ 我们那里制备分析用的小板一般是硅胶：CMC-Na=3：10。相对较稀（好铺，嘿嘿）。用小勺倒点在板上，振两下就成。板要干净，否则烘了要起泡的。CMC-Na最好放置不超过两个月，有颜色了就别用了。一般说来薄的板分离效果好，但载样量不行。TLC重现性差，要靠点标准对照，只能定性。有扫描薄层可以做定量，不过没做过 本人的工作经验：
薄层层析制板
1. 配制4%～5%的羧甲基纤维素（CMC）：称取CMC，溶于冷水中，边加热边搅拌，直至成为清澈、透明的溶液。
2. 40%硅胶：按CMC溶液的量、按40%的比例称取薄板层析硅胶，倒入大研钵中，与CMC溶液混合，充分研磨成均匀糊状。
3. 加入几滴乙醇或丁醇，可起到消泡的作用。
4. 将载玻片置于平台上，用药匙舀取糊状硅胶，均匀地铺在载玻片表面。
5. 自然干燥后，放入烘干箱烘12小时以上。再在105~110℃活化，活化时间为0.5~1小时，冷却后即可使用。 1、硅胶的浓度要适中。太稀铺板时易淌出，同时延长板的干燥时间；太稠，流动性不好，铺板是靠其流动性的，同时也很可能在没铺好前凝固。
2、硅胶研磨要充分，防止气泡。
3、铺板时，用的硅胶量要掌握好。
4、颠板。此过程要与前面步骤连续进行，且不宜久颠，以保证颠好后硅胶还有一定的流动性，放置到平台时仍可以靠自身流动修正颠板及移动所产生的不均。
5、对铺好的板要选择平整的地方，自然干燥，不易人为强制干燥。干燥后再活化，否则板会开裂。
PS：对于CMC溶液的配置，我认为最好提前几日配好，放置再用。配置时可用超声分散，对少量没有立即溶解的，放置后会逐渐消失。 有个办法过滤CMC溶液，在布氏漏斗上平铺薄薄一层脱脂棉，千万保证每个小孔都没漏掉哦！用蒸馏水润湿脱脂棉，启动真空泵，抽紧后就可以放心大胆的倒CMC溶液了，保证滤过的溶液澄清透明，而且长时间放置不沉淀。
另外有几点：
1. CMC溶液的浓度0.3-0.7%比较合适，浓度高了将来显色时如果有加热过程稍不小心板子容易发黑，浓度低了铺出来的板子不结实，轻轻一碰就掉渣，不好保存，而且点样时会很紧张，容易出洞；
2. 薄层板铺好后一定要放置在平的台面上，否则难保证板面硅胶的厚度均匀；
3. 建议硅胶应配制成偏稀的状态，这样铺制更容易，不必辛苦地颠好久，而且可多可少，可薄可厚。
用心练，会做得很好！ 我的经验是CMC-Na与硅胶配成 3：1比较合适，CMC-Na用千分之三到千分之五，硅胶浓度稍大一些或小一些也行，但不能太低，否则板子边缘会凹凸不平。 我也来谈一下自己的一点经验吧。CMC-Na：硅胶为2.5：1较好，楼上师兄说的3：1应该也可以，但是硅胶配的过稀时后果很严重，板子在晾干时会出现许多裂缝，象万寿菊样的开花状，完全不能用。此乃本人的惨痛经历，当时不知道是硅胶过稀的原因，还以为冬天太冷板子给冻裂了，又作了一批放在暖气房，还是照裂不务。浪费了整整一瓶GF254啊（做的是制备板用量较大）。
有个问题至今不明白，请教各位大虾，晾干的板子放在烘箱里怎么全炸裂了，有什么方法可以避免板子炸裂。 各位说的比较全，我在此补充一些：
看分离的药物
化学药一般是作有关物质，需要一定的载药量，所以要适当增加厚度。
中药一般较难分离，需要薄板，以增加分离度。
活化
活化的目的是除去水分
厚板在活化时容易裂，考虑到化学药相对容易分离，所以降低活化温度自然晾干后，40或60摄氏度的烘箱中2～3小时即可，干燥器中保存。
用于分离中药的薄板需要活化，活化后要立即使用，可以称热点样饱和，不然空气中的水分会导致你作无用功，使得吸附色谱转为分配色谱。
硅胶和粘合剂的比例不用固定，稀点铺薄板，稠点铺厚板，以目的决定比例。 加乙醇可以脱气泡？
我是滴加的
3D
可是表面上出现层膜
还挺厚的
和那个牛奶放置时间长了上面的那个类似
为什么？ 首先我想说的是手工铺制的板子，只适宜于定性分析，不宜于分离定量。手工铺板的要点我认为有如下几点：
1.手工铺制的板子常用的有：硅胶G板和硅胶CMC板。前者是煅石膏（石膏经140℃烘烤3—4小时）与硅胶按1—1.3：10混合均匀。每份硅胶G加水2—3份调成糊状，即可使用。后者的操作各位大虾已有论述。
2.载板要求平滑清洁。在使用前一定要处理干净，用洗涤液或肥皂水洗涤，再用水冲洗干净，烘干；
3.CMC-Na要用蒸馏水为溶剂，加热溶解后，放冷，最好滤过使用；消泡剂可直接与CMC-Na溶液混合使用；
4. 我在做时，先在研钵中加CMC溶液，再加硅胶，按同一方向研磨，这样更容易调匀不易包埋硅胶颗粒；稠度以用研棒粘取，成连珠状不成线状下滴为好；配制时遵循现配现用、少量多次的原则，因其易干影响铺制效果。 那么怎样手工操作才能保证铺出的板子平整，均匀呢？ 毛细管点样，点样量不能控制。你可以到药店买1～2ml的注射器作为点样器，可以满足TLC鉴别的要求，而且很便宜哦！ 关于点样，我上学的时候，老师用比较便宜的进样器（大约10几块钱吧，10μl即可），将针尖打磨圆滑，老师好像是用锉一点一点锉的，这样点样的时候样品溶液不容易沿针尖上行（甲醇溶液都这样），并且针尖不会刺破已经铺好的薄层板。现在，我和师兄都是实行的这个办法，还是比较实用的，点样量可以精确到0.5祃。当然，点样的时候手不能抖动，动作要轻，这些要领在于意会，逐渐锻炼，相信你会体会到其中的快感。 我个人觉得，单纯的手铺板，技巧要求很高的，如果有铺板器（也是完全手动的那种），铺出的板子基本上可以保证均一的。
上边有人说，板子会裂口，一则可能是因为硅胶的比例太大，二则可能是，板子要在常温下晾干后，再在烘箱中活化。如果铺完不久就在较高温度下，裂口的几率就比较高的。
对于楼上的，要磨平微量进样器的针尖，简单的方法就是，在展缸的盖子上轻磨（当然是靠近中间部分），就很快能解决问题 ，且很平滑。 根据我的经验，一般情况下，小板（10*10cm）0.5g/块，大板（10*20cm）1g/块 个人经验，板铺好后，自然凉干最好，一定是要从玻板后看也是干的，注意一定要放平，最好控制空气流动
然后再放到烘箱中活化，这样就不会有裂开的现象了
如果直接铺好后或者只是硅胶表面是干的，放进烘箱都会有裂开的。
铺了三个月的板得出的经验。希望有用。 我建议:
1.使用购买的专用薄层板;
2.清洗玻璃板相当重要,切记要清洗得相当干净,不然会在铺板中产生小气孔;
3.铺制好的薄层板先让其稍干后,即看不出有明显的水印,放入烘箱内用50度以下的温度并开鼓风干燥30分钟,再升温干燥至干,注意升温过快在使用的过程中有可能发生起层的现象不利于分离,以上方法经本人两年多的实践效果较好且耗时又不太长!!!!
4.如是铺CMC-Na的薄层板,先将CMC-Na溶解完全,可将溶解成所需浓度加热后超声处理,再抽滤,可很快得到上清液,然后将硅胶倒入在盛有CMC-Na溶液的研钵中,CMC-Na溶液的浓度不宜过高,研磨均匀,大约5-10分钟,用研棒粘取，成珠滴为好,铺板,两面颠簸至平放置平台上,后面步骤可照3.项做.稀稠度多数靠长期的经验积累!!!
5.上面谈到的加乙醇或丙酮消泡我没用过,不过这方法比较可行!! 我的一点心得：
1.板子一定要洗干净，用适中浓度的盐酸浸泡是一个不错的选择。
2.制备CMC-Na时，我的方法是将CMC-Na加入沸腾的水中，慢加快搅，防止成团，完全溶解之后，自然沉降或者是抽滤（建议不用滤纸，太慢了，脱脂棉是个不错的选择）。
3.硅胶的研磨，当然是一个方向了，可以适量的加入一定量的无水乙醇或丙酮来消泡，也可以适当搅拌后放在干净容器内超声，效果都是不错的。手工铺硅胶的用量一般10*20的约3～4克，硅胶和CMC-Na的用量一般是1：2.8～3，具体根据要铺板子的厚度和CMC-Na的浓度决定。
4.颠板子是个耐心活，不说了，多练几次就有技巧了。
5.板子铺好之后一定要放在平面上阴干（一定是阴干，不然你会后悔的），如果看荧光最好是找一个比较干净的房间，不然荧光下板子上会有很多点点。
6.点样，可以用进样器，也可以用定量毛细管（有点贵啊，5ul的2块多一根），点样时尽量使点小且圆整，尽量不要破坏板子。
7.饱和也非常重要，边缘效应很严重的不妨用下端浸在展开剂中的滤纸贴在展开缸的内壁，这样饱和效果会好一些。 附上最权威的方法：
前几天在桂林药药典宣讲上的相关内容
修订的起因
1、TLC的现状
（1）复杂体系的药物（中药、天然药）应用越来越广泛
（2）鉴别↑含量测定↓
2、标准化与规范化
3、中西药对TLC不同要求
中药→鉴别、限量检查、含量测定、指纹图谱分析
化学药→鉴别、杂质检查
修订的重点
一、强调使用预制板
需特别处理和化学改性用自制板
二、规范操作方法与条件
三、增加系统适用性试验
四、单薄长与双波长
再看2005版药典附录VIB都已有明确的规范，大家应都买到手了吧？！
简单说，自制薄层板的要点为：
（1）要用涂布器，如楼上有战友说的，也就100多元，一槽板加一控制板厚度的刮槽；
（2）硅胶与粘合剂比例一般为1：3，粘合剂CMC-Na浓度0.2-0.5％；
（3）点样要用专用毛细管；
（4）严格按药典规范操作。
by the way，我可是我们这辅板第一好手，其实也就"惯手熟尔" 关于点样：我们一直都用液相平头进样针，10 ul就够了，如果点样量低于1ul的话，就用气相进样针。都可以很好的控制点样量，且斑点也可以满足要求。速度也快。可以避免毛细管先快后慢的毛病 结合本人工作经验与各位大虾的高论，对TLC实际操作过程中注意的问题总结如下：
1 粘合剂CMCNa溶液配制
1)CMCNa溶液的溶剂应用蒸馏水，以尽量减少污染；
2)CMCNa完全溶解后，用布氏漏斗过滤；
3)药典规定CMCNa浓度为0.2％～0.5％，实际操作中0.4％～0.5％最为实用；
2 薄曾板的铺制
1)薄曾板最好用洗洁精浸泡1～2小时，这样比较容易清洗，清洗后薄曾板依住竖起，半小时即可晾干；
2吸附剂：0.4％CMCNa溶液（1：3）置研钵中，朝一个方向慢慢研细约10～15分钟，10g吸附剂加入3滴95％乙醇以驱赶气泡；
3)依据薄层板使用需要，将适量研好的吸附剂倒到薄层板上，先用小锤将吸附剂荡匀，倾斜层析板，使吸附剂流至层析板一侧，待吸附剂蓄积一定量后，再反向倾斜层析板，使吸附剂回流；然后是另外两个方向，重复上述操作，后轻颠几下薄层板即可；
4)置平整处过夜自然晾干；如使用较急亦可60℃烘干；
5110℃活化半小时即可。
3 层析
1)在层析缸口涂适量凡士林，增加密封性；
2)以展开剂边缘效应的大小，确定展开剂平衡时间的长短，一般平衡时间在30分钟即可。 其实铺水板是最考技术的，主要是碾磨技术，大家可以探讨一下，要喷硫酸乙醇并定量的最好铺水板哦
