制备黄酮化合物的一点心得，最新帖及回答站友提问！[转自DXY]
【讨论】制备黄酮化合物的一点心得，供大家分享！黄酮类化合物是在中药植物中常见的一类化合物，在制备总黄酮是常遇到同系物，用简单的结晶方法很难得到纯品，建议大家在做黄酮类化合物时要注意观察样品是否有类似金属色泽较重的迹象，或样品难溶解，如果有的话就要考虑用硅胶或凝胶过滤，这样能达到除去这些不明物质的目的，在做黄酮化合物的要注意多个技术结合，其他化合物也一样，不要拘泥于一种方法！
本人做过大量黄酮类物的制备分离和纯化，大家有什么问题可以拿来交流！或许会对你有所帮助！谢谢！！其他方面的问题也可以拿来讨论！ --------------------------------------------------------------------------------
我个人觉得聚酰胺可以用于粗分分离也可以用来制备纯品。关键要看采取的溶剂系统或你样品的状况。不过聚酰胺价格比较贵而且是可以循环用的，所以建议粗分的和分纯品要分开来处理和使用。样品的处理可以用以下程序：植物提取物→大孔树脂（一般不关注多糖的）→
时间关系，下次详细讲 黄芪皂苷，您好。我想请您指导指导下，我分黄酮类成分。用乙酸乙酯萃取，上聚酰胺柱。10kg药材得流浸膏约110g，我上样时先取少量样品在水溶液中试溶，能溶。再取60g样品去溶，却发现溶解性不好，有很多不溶，我只好超声，把能溶的抽滤，再用水去超声不溶的，再抽滤能溶的，反复几次后，原来的110g样品还剩40g溶解性不好的物质，其中在抽滤时滤纸上损失掉一部分。我想问您我这样做对实验结果有影响没有？有的话有什么影响呢？我上的样品够不够量了呢？希望您及各位大侠指教。 黄芩皂苷：你好
黄酮的分离纯化，我曾经用LH-20柱子甲醇冲，内径3cm，柱高75cm，流速控制在每分钟8-10滴。虽然用过，但是也很糊涂，是不是这些因素很影响其分离效果？再者如果有同系物的存在，用LH-20，从理论上来说是不是一中好的分离方法，因为LH-20是分子筛的作用。
还有我们用甲醇溶解样品，可是这样溶解完的产品含量仅为10%左右。从合成的角度是不可能的，可是我们好像做的也没有问题，因为我们取很少的量全溶测得。可是我去不敢肯定我是否在溶解样品上有否问题？能否帮助解决一下，谢谢！ cxjie wrote:
黄芩皂苷：你好
黄酮的分离纯化，我曾经用LH-20柱子甲醇冲，内径3cm，柱高75cm，流速控制在每分钟8-10滴。虽然用过，但是也很糊涂，是不是这些因素很影响其分离效果？再者如果有同系物的存在，用LH-20，从理论上来说是不是一中好的分离方法，因为LH-20是分子筛的作用。
还有我们用甲醇溶解样品，可是这样溶解完的产品含量仅为10%左右。从合成的角度是不可能的，可是我们好像做的也没有问题，因为我们取很少的量全溶测得。可是我去不敢肯定我是否在溶解样品上有否问题？能否帮助解决一下，谢谢！
如果单用甲醇的那么LH-20就起到分子筛样作用,黄酮尤其是黄酮苷的溶解在有些情况下是很好溶解.可以适当加加热.另外也可以在平衡的时候用甲醇水系统.样品也适当加加水看看. jasperfan wrote:
jasperfan wrote:
还有一相问题，我在分离苷元是发现，分离出一种溶液是黄的，可在50度左右蒸干后变成了黑色，如炭一样，按说这个温度，黄酮应该不会变质啊，倒是个什么东西啊，大家遇到过没有。
黄酮苷元好结晶吗，用什么溶剂比较好？
很奇怪!我也不知道,你没加酸或碱吧!很容易结晶.甲醇看看吧!
加了点醋酸
这样容易水解的!PH?
那用了醋酸的洗脱怎么处理蒸干 黄芪皂苷老师:
我现在也在做关于黄铜类的化合物!我的活性主要集中在醇提水溶部位!我现在该用什么展开剂呢!我用了一下氯仿:甲醇;乙酸4.5:0.5:0.2但是展开的不是很好!要是我用展开体系上柱的话!极性该怎么调整呢?
我看到分离的时候大家都用到IL-20,这种填料是不是很贵啊?大概多少呢! lixiaofei2005 wrote:
黄芪皂苷老师:
我现在也在做关于黄铜类的化合物!我的活性主要集中在醇提水溶部位!我现在该用什么展开剂呢!我用了一下氯仿:甲醇;乙酸4.5:0.5:0.2但是展开的不是很好!要是我用展开体系上柱的话!极性该怎么调整呢?
我看到分离的时候大家都用到IL-20,这种填料是不是很贵啊?大概多少呢!
你可以用丁醇萃取,不过不知道你的筛选结果是否确定在水溶部位,还是经过萃取处理后的水溶部位,这部分的展开条件可以适当调高,氯仿甲醇水或是乙酸乙酯甲醇水.IL-20不是很贵,买了可长期用.8000-10000左右. 请教楼主：从银杏叶提取物（EGb761，银杏黄酮≥24%，银杏内酯≥6%）中怎样进一步出去内脂和其他的酚酸，糅质等，以得到银杏黄酮含量更大比如≥80%以上的产品？ redferrare wrote:
请教楼主：从银杏叶提取物（EGb761，银杏黄酮≥24%，银杏内酯≥6%）中怎样进一步出去内脂和其他的酚酸，糅质等，以得到银杏黄酮含量更大比如≥80%以上的产品？
你可以参照有关专利. 黄芪皂苷 wrote:
你可以参照有关专利.
国内国际都有的!请仔细看看! --------------------------------------------------------------------------------
黄芪皂苷老师：
您好！我也一直在从事黄酮类化合物的分离。我想请教您个问题：如何用聚酰胺薄膜来摸索上聚酰胺柱的条件呢？是否在薄层板上调节待分离物的Rf值为0.2－0.3就可以呢？ sunrat_115 wrote:
黄芪皂苷老师：
您好！我也一直在从事黄酮类化合物的分离。我想请教您个问题：如何用聚酰胺薄膜来摸索上聚酰胺柱的条件呢？是否在薄层板上调节待分离物的Rf值为0.2－0.3就可以呢？
差不多就可以了0.1-0.3 --------------------------------------------------------------------------------
银杏黄酮在不在讨论之列？
树脂分离是不是现在唯一的方法？有其他更加优异的方法吗？ 午未子 wrote:
银杏黄酮在不在讨论之列？
树脂分离是不是现在唯一的方法？有其他更加优异的方法吗？
在,可以讨论.不是唯一方法.这个要做大量的实验才能得到数据. --------------------------------------------------------------------------------
黄芪皂苷大哥,你好! 我最近也遇到好多黄酮,但怎么分都不纯,就如你说是同系物那种吧,在普通的薄层板上,是一个点,只有在高效板上跑,在可以看到,前后少量的两三个点,很是郁闷啊. 我想用MCI或反相试试,那请黄芪皂苷大哥给点建议吧.我想用水,乙醇剃度洗脱,以5%的剃度差别洗.我这样设计可以吗?
还是应该跨度大点,10%左右呢? 我以前没过过,请指教啊! shawbill wrote:
黄芪皂苷大哥,你好! 我最近也遇到好多黄酮,但怎么分都不纯,就如你说是同系物那种吧,在普通的薄层板上,是一个点,只有在高效板上跑,在可以看到,前后少量的两三个点,很是郁闷啊. 我想用MCI或反相试试,那请黄芪皂苷大哥给点建议吧.我想用水,乙醇剃度洗脱,以5%的剃度差别洗.我这样设计可以吗?
还是应该跨度大点,10%左右呢? 我以前没过过,请指教啊!
可以用聚酰胺(多元系统)或凝胶(甲醇:水流速控制低) 黄芪皂苷 wrote:
可以用聚酰胺(多元系统)或凝胶(甲醇:水流速控制低)
反相关键是样品的溶解度如何!?? 各位大虾：我现在分离的黄酮化合物的极性很大，请问应该上硅胶柱还是上聚酰胺柱好，谢谢。在线求教！急！ 我想问一下,在洗脱剂里面加醋酸,有可能破坏成分吗?我要分的东西是未知的~ 我好坚 wrote:
我想问一下,在洗脱剂里面加醋酸,有可能破坏成分吗?我要分的东西是未知的~
如果是洗脱剂加的话，建议在回收的时候注意ＰＨ，保留母液对照． 唉,今天用lh-20过了,以甲醇水1:1洗脱,没有分开,样品都积在顶端,不流下去了,可能就是在这个系统溶解性不好吧.
黄芪皂苷大哥,怎么办呀,没办法了 shawbill wrote:
唉,今天用lh-20过了,以甲醇水1:1洗脱,没有分开,样品都积在顶端,不流下去了,可能就是在这个系统溶解性不好吧.
黄芪皂苷大哥,怎么办呀,没办法了
可以直接用甲醇或更大比例甲醇洗脱看看＞ 黄芪皂苷:是不是pH要调回来,那用什么调?如果是梯度洗脱,那换梯度的时候,酸性如何改变呢?你说和母液对照,那就是有可能破坏拉,我的样品好少,再破坏就没有拉~~惨 我好坚 wrote:
黄芪皂苷:是不是pH要调回来,那用什么调?如果是梯度洗脱,那换梯度的时候,酸性如何改变呢?你说和母液对照,那就是有可能破坏拉,我的样品好少,再破坏就没有拉~~惨
是调回中性，用什么调方法很多，如果是酸就用氢氧化钠溶液调，调完回收后无水甲醇溶出样品或凝胶脱盐．如果是梯度洗脱,那换梯度的时候,酸性如何改变呢?这个是有针对性的，根据实验当时情况而定．一般要看展开溶剂展开的结果，所以要保留母液，万一发现问题有个参照． to 黄芪皂苷
您好,我现在要分芒柄花素和阿夫罗摩辛(afromosin)的对照品,就剩100-200mg了,纯度足够我打核磁.这两个东西溶解度都不好,怎么才能把纯度提高啊? damaocheng wrote:
to 黄芪皂苷
您好,我现在要分芒柄花素和阿夫罗摩辛(afromosin)的对照品,就剩100-200mg了,纯度足够我打核磁.这两个东西溶解度都不好,怎么才能把纯度提高啊?
重结晶尝试过吗?甲醇:水等,这两个东西溶解度是不是很好,适当少量看看溶解性.实在不行的话用聚酰胺多元体系.氯仿:甲醇:丙酮:丁酮. 黄芪皂苷 wrote:
重结晶尝试过吗?甲醇:水等,这两个东西溶解度是不是很好,适当少量看看溶解性.实在不行的话用聚酰胺多元体系.氯仿:甲醇:丙酮:丁酮.
谢谢您的指教,最初我就是重结晶得到这两个东西的半纯品的,是用氯仿:甲醇体系.可是靠它把纯度提上去,我表示怀疑.
今天用PTLC想是试验一下,可是点完样后就发现有晶体析出.待会去刮板子,看看结果如何.不行再试重结晶吧 damaocheng wrote:
谢谢您的指教,最初我就是重结晶得到这两个东西的半纯品的,是用氯仿:甲醇体系.可是靠它把纯度提上去,我表示怀疑.
今天用PTLC想是试验一下,可是点完样后就发现有晶体析出.待会去刮板子,看看结果如何.不行再试重结晶吧
好的多次重结晶是可以提高纯度的，有些东西重结晶效果更佳 to 黄芪皂苷前辈
告诉您一个好消息,我把芒柄花素和afromosin通过PTLC分开了,然后过了一遍 sephadex LH-20(DMF助溶上样,甲醇洗脱),得到了少量的纯品(纯度>99%).
我没有选择重结晶是因为这两个东西的溶解性质非常相似,要么一起不溶要么一起溶.
现在的问题是开始的流份中少量色素、样品和DMF一起下来了,我想减少前面几份中样品的含量，可以选择什么方法？用90%的甲醇洗脱可以改善吗？或者选用更长的凝胶柱？
