(转帖)聚酰胺柱分离总黄酮类
[color=limegreen]转自:DXY[/color]大家好！
我以前没有用过聚酰胺柱，请问:
1)聚酰胺柱材料市面可以直接买到吗？
2)聚酰胺要如何预处理才可以使用？
3）聚酰胺用于分离总黄酮，试剂洗脱顺序是怎样安排的?
谢谢！ 聚酰胺柱色谱分离黄酮类化合物，洗脱时大体有以下规律：
1， 苷元相同，洗脱先后顺序一般是： 叁糖苷、双糖苷、单糖苷、苷元；
2， 母核上增加羟基，洗脱顺序一般是：具有邻位羟基黄酮、具有对位（或间位）羟基黄酮；
3， 不同类型黄酮化合物，先后流出顺序一般是：异黄酮、二氢黄酮醇、黄酮、黄酮醇；
4， 查耳酮往往比相应的二氢黄酮难于洗脱。
仅供参考。 谢谢tlabcd的回复!
我是从复方中提取总黄酮成分。我想知道的是如果用聚酰胺吸附，剃度洗脱的试剂顺序是如何安排的。 这可要具体对待，也不太容易一下说清。
聚酰胺吸附属于氢键吸附，吸附强弱取决于与之形成氢键缔合的能力。一般情况下，各种溶剂在聚酰胺柱上的洗脱能力由弱至强，可大致排列为：
水 -- 甲醇 -- 丙酮 -- 氢氧化钠水溶液 -- 甲酰胺 -- 二甲基甲酰胺 -- 尿素水溶液。 一般认为聚酰胺是以氢键为作用力的吸附层析。化合物中羟基越多，吸附越牢固，越难以洗脱。
目前有市售的柱层析用聚酰胺，但是其颗粒通常较粗，不利于分离。一般在使用前将其研磨，过80和100目筛，取80~100目的粉末装柱。
梯度洗脱常采用水-乙醇系统，醇的比例逐渐增加，如果有纯乙醇还不能洗脱的样品，再考虑用其他溶剂。 国内的聚酰胺都比较差，经常洗了一个礼拜，洗脱液里还有聚酰胺残余，聚合的不好，有的时候想用它，没有办法阿 柱材料研成细粉？那么，聚酰胺材料是像氧化铝柱一样一次性使用的吗？还是像大孔树脂一样可以回收使用？ 呵呵，是啊，柱材料研成细粉。
对于吸附柱层析，从原理上来说，吸附剂的粒径越小，其比表面积越大，单位质量的吸附能力越强，分离效果越好。但如果粒径过小，吸附剂间的空隙过小，流动相不易通过，此时要采用高压将其泵入，如HPLC。
市售的柱层析用聚酰胺粒径大概在60目左右，且颗粒粗细不均匀，分离效果不好，因此将其研碎，取颗粒比较均匀的一段细粉装柱。当然大于100目的细粉也是很好的，只不过研磨非常不易，只要体力足够，100~120目；120~140目；140~160目都是可以推荐使用的。
另外有一个研磨聚酰胺的小窍门：研磨时加很少量的无水乙醇润湿一下，就会容易一些。
聚酰胺对植物粗提物的一些成分如鞣质有不可逆的吸附，一般不回收使用。
longbow主任，有聚酰胺残留的样品过一根凝胶柱（Sephdex LH20）就可以纯化了，很方便，可以重复使用。 谢谢wcyj1688的详细讲解。谢谢各位大侠仗义相助！ 谢谢wcyj1688将自己的经验贡献出来
关于聚酰胺的去除残余，我问过很多人，包括生产厂家，都没有合理的方案，今天总算知道，谢谢，不过凝胶柱是不是自己买填料来装？（哪里卖的比较好？我从来没有装过凝胶柱，所以不是很清楚，不好意思） Sephadex LH-20凝胶柱自己装，Sephadex LH-20还是Pharmacia公司的好，我们实验室用的很多，以前从国外原装进来是2400RMB/100g，现在国内好象是分装的，1200RMB/100g，Pharmacia公司中文名称是：安玛西亚。上海有办事处。 聚酰胺我用的是浙江台州的产品，100-200目，效果不错，聚酰胺的洗脱溶剂一般是水-乙醇或甲醇的不同配比（0%，10%，30%，70%，95%），具体哪个比例合适，可以先跑聚酰胺膜TLC确定一下。我想你是制备总黄酮，不必担心聚酰胺残留的问题。聚酰胺可以重复使用，要用NaOH和醋酸处理。 我也找到一瓶聚酰胺（柱层析用，颗粒度：200－400），请教faran大侠：我是不是可以直接装柱，那具体怎么装呢？湿法装柱？用水还是乙醇或者甲醇？经过什么步骤才 可以上样呢？ 我一般是直接装柱，湿法、干法都可以，要看你的样品溶不溶于水了，如果能溶，湿法相对好一些，样品损失的少。如果样品很杂，而且溶解度也不是很好，可以干法上柱，我曾经用此方法分离过多种黄酮，效果很好。湿法上样和反相硅胶一样，而干法就和硅胶一样，只不过，千万别指望聚酰胺柱可以和硅胶柱一样漂亮，很难装实。尽量用乙醇，毒性小。
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