【转帖】【求助】SLN包封率测定
好像大家对SLN的讨论不太热烈。我用的硬脂酸做载体材料，试了离心、葡聚糖凝胶过滤、反透析、调PH后离心的方法，可是都无法把游离药物分离出来。不知道各位大侠有没有什么好办法。
硬脂酸的分子量太小，可能直接离心没法沉淀。我最想用的是调PH值让其絮凝后离心沉淀的方法，但我试过了调PH1－3都不行。放置一周倒能沉淀下来，但药物好像释放出来，测出的包封率极低。
急着毕业，请大家伸出援助的手吧！谢谢！ 离心、葡聚糖凝胶过滤、反透析、调PH后离心的方法？你还是具体说说你都是怎么做的？一般葡聚糖凝胶肯定可以将游离的药物和纳米粒分来，毕竟大小差很多，分子筛原理怎么的也分开了。高速离心也可以考虑，如果你用的介质系统密度不大，粘度也不大，SLN还是可以离心沉降的。放置一周能够沉淀说明完全可以用高速离心来加速其沉淀！ 请您告诉一些必要的资料和细节问题。在大的方向上应该没有问题。分析来探讨去，其实能够进行纳米粒后进行分离和含量测定的方法仅有那么几种。个人认为试验的成败在于细节的掌握。
必要的参数：如纳米粒的粒径及分布；以上方法的具体操作步骤。 1 请确认一下你的SLN是否真的制备成功。
2 如果有淡蓝色乳光，说明已制得SLN，使用离心法不能分离可能是离心的速度和时间不够。调PH离心也不行，可能是PH调过了，使硬脂酸带大量正电而无法凝聚所致。葡聚糖凝胶过滤不行可能是你的药物脂溶性太强所致。
以上是个人观点，仅供讨论。 greatet wrote:
3、葡聚糖凝胶（sephendex G-50)上样量1ml，用纯净水洗脱，2ml接一管，只有一个峰，而且持续了13管。
个人感觉这个方法比较可靠，有可能成功。
洗脱过程中有没有观察到SLN 流出（带乳光）？
只有一个峰的原因：没分开；或者SLN 流出来了，13管时游离药物尚未流出；或者药物水溶性差，有可能析出吸附在凝胶柱上。
对策：改变洗脱液，比如用不同ph的缓冲液；延长洗脱时间；调整洗脱液ph或假如少量有机溶剂（注意不能破坏SLN ）。 谢谢版主。
在洗脱过程中没有观察到带乳光液体的流出。而且滴的特别慢，可能7、8秒才能滴一滴。所以用这个办法太累了，最后实在坚持不住，就只接了30管。
我会试试改变洗脱剂。等结果出来再和大家报告。 这个方法也要看你的药物性质，能够溶于洗脱液才能把游离药物洗脱下来，如果不溶，药物可能会析出留在柱内。 只有一个峰的原因：没分开；或者SLN 流出来了，13管时游离药物尚未流出；或者药物水溶性差，有可能析出吸附在凝胶柱上。
斑竹说的有道理，个人认为极有可能是游离药物还没有出来呢。您的流速比较合适，我原来做的时候一分钟7－8drops，但是在我的印象中一直到第七管（也是2ml一管）才能观察到微乳光，而且持续了大约4－5管，而后游离药物才能检测到，我总共接了大约有35管左右。虽然您的情况不是特别清楚（如第几管开始测定到药物），但是仅接13管是不够的。强烈建议延长洗脱时间。
另外如楼主所言，对洗脱液的选择也是很重要的，一定要然药物溶解哟。
原来张强老师的学生做过硬脂酸的纳米粒，如果能得到他的指导可能要明确些。 不知楼主能否告知硬脂酸纳米粒的制备工艺和处方及稳定性情况，本人多次采用文献报道的方法制备硬脂酸纳米粒，但是结果不是很好。刚得到时可见微乳光，但放置一天后，颜色变浊，一星期后变白，显微镜下看到大量絮凝。考察了多种制备方法和表面活性剂，都没有改善，很是懊恼，现在的文献是不是都骗人的，希望楼主和各位有经验的朋友能给我指导。 我也是用的sephendex G-50柱测定sln的包封率，也遇到和楼主相同的问题游离的药物几乎检测不到，我的药物水溶型不好，对乳光部分的检测是否也有影响？很奇怪的是，我看了些文献，很多脂溶型的药物都是用的蒸馏水洗脱的，难道他们的游离药物就洗得出来？ 我想是否可以尝试微柱离心的方法。
1、可以减少检测耗时。每次离心3min，小柱冲洗3次，一个样品前后有半小时就够了，而且可以同时测定好几个处方样品。
2、由于这个方法用的是干柱，对样品的稀释很少，所得样品浓度高方便检测。
不过这个方法载样量比较小，而且干柱的制备比较麻烦，还有就是柱子的后处理，尤其是你这种不溶性药物的后处理比较繁琐。但我觉得还是比大柱可行，我曾经用这种方法测定过脂质体的包封率效果不错。 看来做SLN 的战友还挺多的。我五一之前试了超滤的方法，效果不错，离出的液体很澄清。哎，可惜超滤管是一次性的，滤出的液体一次比一次少。不过我还是打算继续用下去。这个方法很简单，而且条件比较温和（4000rpm）。
可是测出的包封率好低，只有35%，是制备方法的问题吗？
希望大家继续讨论下去。 根据您说的现象，建议：
1.能否将您说的滤过后的澄清液体在电镜下观察一下，注意哟，肉眼澄清可不等于没有纳米粒。
2.您还没有说您的药物的理化性质和您的制备方法呀，我怎么判断您35％包封率是否真实和准确？
3.超滤管不能重复利用的，因为非常容易堵住的，而一旦堵住了，自然影响下次测定。不过您可以在进行超滤之前用微孔滤膜滤一下，尽量避免大块的物质堵住孔。毕竟其过滤面积也就那么大。 很久没来了。我做的SLN也是不稳定，放一天以后粒径明显增大，但也只有硬着头皮做了，不行只有冻干了。现在用超滤法测包封率，结果很不好，所以郁闷了很长时间。很奇怪，如果用离心很多次的超滤管测出的结果不错，可是用新管子得到的结果很低。不知道是不是我的药物析出结晶了。唉！我的药在丙酮中根本不溶，在乙醇中溶解度也很低。就只溶于甲醇。这可能也是包封率低的原因吧。大家有没有什么好办法啊。
我的QQ：283061900 欢迎讨论啊。 我觉得难溶性药物的包封率测定是个很困难的事，我有个提议，如果我们所制备的纳米粒小于450nm,一般多能满足，能否用过滤的方法测包封率？滤过去的就应该是被包进的药物，未滤过去的是析出的游离的药物，我用过该方法，还是可行的，并进行过方法学验证，说明我的游离药物不会被滤过。 用冷冻超速离心机试试看,我们做纳米粒都是用冷冻超速离心机取游离药物测包封率,不过冷冻超速离心机一般做细胞研究的实验室才会有. 我试过冷冻超速离心的方法，因为硬脂酸的密度太低，根本就离不下去。不知道哪位高人可以解决SLN稳定性差的问题啊。 不知谁用过微柱离心，具体操作方法是什么，分离效果好吗？
我用葡聚糖G25凝胶柱, 药物脂溶性的，洗脱剂中加了些有机溶剂，3ml一管，接了36管，HPLC检测不到游离药物，想该用微柱离心，哪位大虾用过，请多指点下 ，谢了。 我和wxiwang有同感，以硬脂酸为固体脂质，采用了很多方法都没能成功得到稳定的纳米粒，最大的可能是硬脂酸来源不同。我用的是分析纯的试剂，greatet可否告知用的是哪个厂家的硬脂酸？
有关SLN的包封率测定，因SLN密度较小，若粒径又在100nm以下的话，离心是很难的。我觉得最好是采用葡聚糖凝胶层析法，收集SLN，适当溶剂提取药物后测定。
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