【转帖】【讨论】离子交联法制备壳聚糖纳米粒的问题
[url]http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=115&id=2597756&sty=1&tpg=2&age=-1[/url]国内外文献对壳聚糖纳米粒的报道已经较多，但是试验中发现纳米粒的混悬液制备是可能的，但是将纳米粒从中分离出来却有一定难度，文献报道普遍使用超速离心法。但是离心后的壳聚糖纳米粒的产率以及后续干燥却在试验中难以实现，从而也设计到载药量的计算和制剂的应用形式问题，希望大家对这一问题进行讨论，大家见仁见智哦。 是问题太没水平呢，还是大家研究的少啊，看来来这里战友都是实业派啊，
不过还要谢谢药渣师父pm给我很多意见。 问题还是很有水平的，可能大家都比较忙，无暇讨论。
确实如楼主所言，纳米粒的混悬液制备是可能的，但是将纳米粒从中分离出来却有一定难度。
超速离心法文献报道很多，但却有很多弊端，比如离心后纳米粒沉淀不完全，离心过程中药物泄漏，离心后纳米粒粘连粒径增大等，因此多用于包封率测定，用于大生产是很不现实的。
我觉得用于大生产的可行方法非冷冻干燥莫属，虽然不能实现纳米粒与游离药物的有效分离，但只要每批产品都采用可靠方法测定过包封率，将来产品说明书及标签上注明即可，也没有必要非得分离。
总之，纳米粒制剂的上市和工业化大生产还有很长的路要走。 但是如果不能分离得到固体纳米粒，则无法计算载药量，我学习过有的博硕士论文，有人计算载药量是用包封入的药量除以制备纳米粒材料的投料量，这显然有些牵强。
不过，如果都以这种方法去考察载药量，平行操作的话也是可以比较出工艺的优劣但是处方就不好说了。做的人心里很难受。
还有一点我不理解，老外能做出来，我们怎么却做不出来。除了壳聚糖是国产，其他条件我不觉得有太大差别。郁闷！ budbud wrote:
有人计算载药量是用包封入的药量除以制备纳米粒材料的投料量，这显然有些牵强。
同意你的观点，这样做没有考虑制备中材料的损失，只能是比较粗略的结果。你的意思是分离得到固体纳米粒，干燥后再通过含量测定测出载药量，就像测其他固体制剂（片剂、胶囊等）含量一样，这样的载药量确实比较符合实际。理论上可以这么做：通过超速离心或凝胶色谱方法分离出纳米粒，洗去表面吸附的药物（超速离心法），再次分散到介质中超速离心法），所得纳米粒体系冷冻干燥得到固体纳米粒，取固体纳米粒测定载药量。但实际上在此过程中极可能发生纳米粒聚集，药物泄漏等情况，得到的结果往往不会令人满意，这也是很少有人这么做的原因吧。
budbud wrote:
还有一点我不理解，老外能做出来，我们怎么却做不出来。除了壳聚糖是国产，其他条件我不觉得有太大差别。郁闷！
国产的辅料的质量确实令人担忧！！！ 我做过壳聚糖纳米粒，与Budbud颇有同感。我用的敷料是sigma的，确实可得到很漂亮的纳米粒。但壳聚糖纳米粒作为一般药物（化学药物）的载体，存在最现实的问题是如何生产的问题，因为其中纳米粒的浓度太低，即使进行TEM观察也得离心浓集后尚可，且存在离心不完全，离心得到的纳米粒再分散等问题。但作为基因药物的载体，因基因药物本身所需治疗量低，或许尚可。 作为化学药的载体也可以利用壳聚糖醋酸溶液荷正电的性质，只不过对于药物需要令其解离为阴离子形式存在，包封一定量还是有可能 的，国外文献有这种思路，我一直 在尝试。
分离不到， 我就索性用混悬液好了，做个药效比较，或是体内分布看看，
从小没有人关注，得到诸位前辈的讨论和帮助，很开心了。呜呜... 如果化学药是阳离子呢？是不是将其溶解于酸性的壳聚糖溶液中，再加入聚磷酸盐来制备纳米粒，我没有做过，不只这样做出来和阴离子化学药做出来的纳米粒的性质是否会有大的不同。
我想离子交联法制备纳米粒本身制备出的粒子就不是传统意义上的“包合物”形式，而是靠正负电荷相互吸引，互相交联而成（是不是有点像蛋白质的三级结构呢），只不过那个正电荷用的是链状的大分子壳聚糖，负电荷用的是小分子的化学药和聚磷酸根，因此这种揉杂而成的粒子一定不如其他方法制备的粒子稳定。如果按照[**通过超速离心或凝胶色谱方法分离出纳米粒，洗去表面吸附的药物（超速离心法），再次分散到介质中超速离心法），所得纳米粒体系冷冻干燥得到固体纳米粒，取固体纳米粒测定载药量。**]做下来，个体差异可能大的多，效果不会好。所以budbud不要郁闷了
我想请教各位前辈制备出的纳米粒混悬液在冻干时加什么保护剂效果较好？ 如果所有的都是平行操作，那么只要测得其中几组，那么所得的包封率应该是有一定依据的吧？只要把其中几组过柱测得包封率，其他组的包封率应该也差不多吧。前提你测的几组包封率差别不大的情况下。 包封率很低的 用离心法测都是7％到8％左右。
包封率测定还是合理的，我上面说的是载药量的测定合理性值得探讨。
我想起另外的问题，不知对于类似纳米粒制剂的质量标准，是不是主要将包封率列入控制的指标当中，譬如说注射用微乳等制剂，申报是时的质量标准所定各项中是否包括包封率和载药量这样的指标呢？ 那楼上的包封率偏低了，那么载药量估计也危险了。可能是测定的方法中有点问题吧。
如果是微囊微球申报时还是有要求的，但是纳米粒到现在为止还没有明文规定，能允许部分游离药物的存在。 我正打算用葡聚糖凝胶柱试试测包封率看看如何？
国外类似的文献也是包封率也不高的，对于水溶性的阳离子药物最高也就是十几到二十的样子，但是他们使用离心法测的，我就不明白怎么能测出来，我用离心法重复了好多次，有一次竟然测出负值！都快吐血了！
葡聚糖凝胶柱层析法测cs纳米粒的文献到是没有看到过。不知大侠们有什么见解？
还有，我只是做论文研究，不是报新药，载药量搞不定我就不想用他做指标了，不知能否逃过教授们的法眼。 budbud wrote:
我正打算用葡聚糖凝胶柱试试测包封率看看如何？
国外类似的文献也是包封率也不高的，对于水溶性的阳离子药物最高也就是十几到二十的样子，但是他们使用离心法测的，我就不明白怎么能测出来，我用离心法重复了好多次，有一次竟然测出负值！都快吐血了！
葡聚糖凝胶柱层析法测cs纳米粒的文献到是没有看到过。不知大侠们有什么见解？
还有，我只是做论文研究，不是报新药，载药量搞不定我就不想用他做指标了，不知能否逃过教授们的法眼。
不管用什么方法测包封率，关键还是方法本身的可靠性以及纳米粒实际包封率的重现性。纳米粒包封率测定结果差异较大是这两方面共同作用的结果。
对水溶性药物纳米粒而言，离心法测定的包封率确实重现性差，我以前测过同一批样品同时离心，结果都差很多，令人郁闷。离心超滤法的结果重现性也不好。
葡聚糖凝胶柱法还是较为可靠的，但耗时较长，如果在过凝胶柱的过程中载药纳米粒中的药物泄漏，测得包封率会偏低，偏低的大小要看泄漏的快慢和分离时间的长短。
如果能搞定包封率，批间重现性好就很不容易了，载药量可以不考虑。
个人意见，仅供参考，并祝好运！ eastar wrote:
不管用什么方法测包封率，关键还是方法本身的可靠性以及纳米粒实际包封率的重现性。纳米粒包封率测定结果差异较大是这两方面共同作用的结果。
对水溶性药物纳米粒而言，离心法测定的包封率确实重现性差，我以前测过同一批样品同时离心，结果都差很多，令人郁闷。离心超滤法的结果重现性也不好。
葡聚糖凝胶柱法还是较为可靠的，但耗时较长，如果在过凝胶柱的过程中载药纳米粒中的药物泄漏，测得包封率会偏低，偏低的大小要看泄漏的快慢和分离时间的长短。
如果能搞定包封率，批间重现性好就很不容易了，载药量可以不考虑。
个人意见，仅供参考，并祝好运！
首先谢谢楼上提供文献。
就我制备的纳米粒工艺，实际包封率的重现应该问题不大，做过三批样品在测定重现较多的是10到13％的范围内，但出现了一次负值和几次明显无法合理解释的数值（因为有两个处方比较，较差的包封率反而高于好的处方）
葡聚糖试了一次，原料药上柱竟然5min就出来了，可能是装的太短了吧，也说有可能是凝胶时间长了，坏了（我用的是旧的），再做吧，总之要感谢各位老师的帮助。 原来葡聚糖凝胶G50也要分粒径的啊，我先前用的时50至100um的，出的早一点，但是用100－300的就好了，奇怪了，粒径大了反而保留时间长了了，有意思啊。 瞎忙了一段时间，回到试验中，对于葡聚糖凝胶粒径大小造成保留时间差异的问题，查到过一篇文献也是这种结果，但没有解释原因。我是这样想的，可能是由于粒径大的凝胶颗粒溶胀后体积增大，在柱中堆砌不紧密，在相同流速条件下，游离药物在凝胶颗粒中的移动距离延长，从而保留时间延长。
还有就是离子交联法这种方法的对于制备小分子药物壳聚糖纳米粒的可行性，我做了好长时间，难度还是很大的，主要是纳米粒对药物的有效包裹和结合，小分子药物不像蛋白和多肽类，分子量大、结构复杂、荷电，其与壳聚糖分子形成包裹，物理吸附以及静电吸引的作用都较强，因此制备出的载药纳米粒如皮蛋等前辈所讲存在浓度太低，包封率低，体系不稳定（易泄漏）的问题。
做点科研真是不容易。 bianbenjamin wrote:
我想离子交联法制备纳米粒本身制备出的粒子就不是传统意义上的“包合物”形式，而是靠正负电荷相互吸引，互相交联而成（是不是有点像蛋白质的三级结构呢），只不过那个正电荷用的是链状的大分子壳聚糖，负电荷用的是小分子的化学药和聚磷酸根，因此这种揉杂而成的粒子一定不如其他方法制备的粒子稳定。如果按照[**通过超速离心或凝胶色谱方法分离出纳米粒，洗去表面吸附的药物（超速离心法），再次分散到介质中超速离心法），所得纳米粒体系冷冻干燥得到固体纳米粒，取固体纳米粒测定载药量。**]做下来，个体差异可能大的多，效果不会好。所以budbud不要郁闷了
我想请教各位前辈制备出的纳米粒混悬液在冻干时加什么保护剂效果较好？
诚如bianbenjiamin所说，用离子交联法制备纳米离子药物包合物与环糊精包合机理并不相似，这是由于壳聚糖本身的结构、性质所决定的。壳聚糖大分子链在溶液中的构象受溶液中的离子强度影响很大，而且与壳聚糖本身的脱乙酰度关系也很大（参见蒋挺大《壳聚糖》；徐**，武汉大学博士论文），理论上多价的酸根离子均可作为离子交联剂来制备纳米粒，如柠檬酸根、聚磷酸根等，文献报道中常用聚磷酸盐。因为是离子交联，强度低，可以用酶液降解消化（如溶菌酶、蛋白酶等）来测定药物结合率。 我是新手，这种离子交联可以制备<10um的微球马，我没有查到这方面的文献，大多都是用这种方法制备纳米级还有500um左右的，我做了好久还是没有做出来，希望各位高手指点迷津！！！ 1.只是我不理解你们所说的超速离心法是否是冷冻超速离心法,我听说有前辈说过一定要用冷冻超速离心法,因为转速太高,纳米粒很容易破裂,使包进的药物游离出来,造成包封率和载药量下降.
2.至于包封率和载药量的计算,我也看过相关文献,包封率=(总药物量-游离药物量)/总药物量,我决的可以接受:至于载药量==(总药物量-游离药物量)/纳米粒的量:我不能接受这个计算公式,我觉得最好能有一种溶剂能够把纳米粒里的药物溶解出来,再把溶解出来的量除以纳米粒的量.才能接受.
3,至于做有关纳米粒相关方面的论文应该是很简单的事,只是要工业化生产的话,恐怕还有一段很长的路要走. 有没有人做壳聚糖－海藻酸钠微球的呢，讨论下。 壳聚糖纳米粒超速离心法后,在通过冷冻干燥后确实能得到漂亮的纳米
颗粒的,
不过通过这种方法制备的纳米就粒径太小了,就10-20纳米,
文献报导都没有这么小的有点想不明白.想请教各位了,这可能什么原因啊?
你们的纳米颗粒也这么小吗? 谢谢!
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