[转帖]装柱经验谈
[color=darkblue] [b]看到一个不错的讨论帖，转过来与大家分享一下，大家如果有什么好的经验，欢迎来此交流！[/b][/color] 第一步 首先选分离样品的合适的柱子 当然柱子越长越好，分离效果越好，但考虑浪费的问题，还是应考虑柱长的。若是硅胶柱，样品的1-1.5倍量做伴样硅胶，30-40倍硅胶上柱，硅胶量的2倍就是保留体积，你的柱子至少大于这个体积。第二步 防止硅胶渗漏，要塞脱脂棉，这一步也是挺关键，浸湿后塞进去。
第三步 用你所选溶剂溶解硅胶，边搅拌尽量快的，在玻棒的引流下填入，这样不使气泡进入。（记录你的溶剂体积），使溶剂慢慢渗下，保持所填面是平的。勿让溶剂渗完，上面加保护硅胶。
第四步 装好的柱子要沉降过夜，使它更实。
以上就是我装柱子的过程，不知是否表述明白. [quote][b]引用第1楼[i]pengyao0616[/i]于[i]2007-03-20 19:25[/i]发表的[/b]:
第一步 首先选分离样品的合适的柱子 当然柱子越长越好，分离效果越好，但考虑浪费的问题，还是应考虑柱长的。若是硅胶柱，样品的1-1.5倍量做伴样硅胶，30-40倍硅胶上柱，硅胶量的2倍就是保留体积，你的柱子至少大于这个体积。
第二步 防止硅胶渗漏，要塞脱脂棉，这一步也是挺关键，浸湿后塞进去[color=red]。(请问是否是用溶解硅胶的溶剂浸湿呀）[/color]
第三步 用你所选溶剂溶解硅胶，边搅拌尽量快的，在玻棒的引流下填入，这样不使气泡进入。（记录你的溶剂体积），使溶剂慢慢渗下，保持所填面是平的。勿让溶剂渗完，上面加保护硅胶[color=red]。（何为保护硅胶）[/color].......[/quote] 请问是否是用溶解硅胶的溶剂浸湿呀可以的 我一般加水浸湿，溶解硅胶的溶剂当然更好。保护硅胶就是硅胶 因为加到上面，起到保护的作用，所以叫成保护硅胶，当然可以用脱脂棉代替。 上柱硅胶300-400 g。
选柱子的事，要摸索。所以我也不能说明白柱子的规格。我觉得300-400g至少得用1000ml的柱子吧。
梯度洗脱 若选择盲跑，选择合适的溶剂（根据样品的极性）。比如石油醚：丙酮=100：10，100：20,………最后全丙酮冲柱。有时粗分三个梯度合并为一个馏分，每个梯度至少三个保留体积吧。
有目的跑柱，首先要用你的样品点薄层板，来摸索梯度，那样就会有目的的来做。
但我们往往选择盲跑。这个我也说不好，我们都应向高手请教，以便减少工作量。 硅胶柱有两种装法.湿法和干法,湿法没装过,干法装了不少.
干法装柱步骤:
1 根据拌样量选择柱子.
2 拌样量和硅胶用量之比为1:4(经验).
3 装时边拍边旋转,确保装柱均匀.(这很重要)
3 洗脱剂按从小到大的顺序. 装柱可分为湿法和干法两种,湿法上面那位老兄介绍了,下面我说一下干法怎么装:
选柱:根据你的拌样量来选择.装柱:一般用硅胶的量为拌样量的四倍.在装时边旋转边拍,使装柱均匀.由于硅胶是正相柱,所以洗脱时洗脱剂极性由低到高.
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