【有奖征集】征集免疫及微生物实验技术中常用试剂配方SOP(页 1) - 免疫与微生物版 - 医学论坛|医药招商|药学论坛 - 鸭绿江医药论坛

tommy21 发表于 2007-3-22 21:08

【有奖征集】征集免疫及微生物实验技术中常用试剂配方SOP

受pekingma版主一帖启发，有奖征集免疫学及微生物学常用试剂或培养基SOP发帖格式如下试剂名称：（英文全称及缩写）所需药品及剂量：药品化学式剂量以g或mg为单位，液体试剂以l或ml为单位操作过程：如果有必要，应说明。如药品加入的先后顺序，在何温度操作等应用范围：如ELISA，免疫印迹，流式细胞术，免疫组化，ELISPOT，细菌培养等保存期限及温度：如4℃，最多一年。奖励方法：1.每总结1个奖励5财富2.一帖总结4个奖励1威望和25财富,以此类推。3.如果其他会员对前面会员所列出的SOP有异议，可以跟帖讨论之，如提出的异议确有依据，经各位版主查证后重奖2－3威望。4.单ID最多发三帖其他版主可以再行对本帖修改直至完善，愿我们携手打造鸭鸭免疫学与微生物学良好的学术氛围。

tommy21 发表于 2007-3-29 15:36

先来开个头！希望大家踊跃发言

1
试剂名称：1.0mol/L Tris•HCl （Ph7.5）

所需药品及剂量：Tris (MW121.14)    30.29g
               蒸馏水          200ml
操作过程：溶解后，用浓盐酸16ml调pH至7.5，最后用蒸馏水定容至250ml，高温灭菌后室温下保存

应用范围：western blot
保存期限及温度：室温保存

2
试剂名称：1.5mol/L Tris•HCl（pH8.8）
所需药品及剂量： Tris (MW121.14) 45.43g
                  超纯水       200ml
操作过程：  溶解后，用浓盐酸调pH至8.8，最后用超纯水定容至250ml，高温灭菌后室温下保存。
应用范围：  western blot
保存期限及温度：室温保存

3
试剂名称：0.5mol/L Tris•HCl（pH6.8）
所需药品及剂量：Tris (MW121.14) 15.14g
                  超纯水       200ml
操作过程：溶解后，用浓盐酸调pH至6.8，最后用超纯水定容至250ml，高温灭菌后室温下保存。
应用范围：  western blot
保存期限及温度：室温保存

4
试剂名称：0.01mol/L PBS（ pH 7.2-7.4）NaCl       8g
所需药品及剂量：  KCl       200mg
               NaH2PO4    240mg
               K2HPO4    1440mg
               蒸馏水至       1000ml

操作过程：无特殊
应用范围：  这个不用说了吧，常规试剂
保存期限及温度：室温保存

tommy21 发表于 2007-3-29 16:08

1
试剂名称：0.15 mol/L NaCl

所需药品及剂量：NaCl（MW58.44） 0.877g
            蒸馏水至       100 ml

操作过程：无特殊
应用范围：western blot
保存期限及温度：高温灭菌后，室温保存

2
试剂名称：17.4mg/ml (100mmol/L)PMSF
所需药品及剂量：PMSF    17.4mg          应用1 mmol/L
         异丙醇    1ml
保存期限及温度：分装于1.0ml离心管中，－20℃
操作过程：无特殊
应用范围：蛋白裂解

3
试剂名称：10％SDS
所需药品及剂量及配置方法： SDS       1g  50℃水浴下溶解。1ml/管，如长
               蒸馏水至    10ml。
保存期限及温度：室温保存，保存中出现沉淀，水浴溶化后，仍可使用
应用范围：western blot

4
试剂名称：10％过硫酸胺（AP）
所需药品及剂量：过硫酸胺    0.1g
         超纯水    1.0ml
保存期限及温度：4℃保存，保存时间为1周。
操作方法：无特殊
应用范围：PAGE电泳

wbhann 发表于 2007-3-30 11:03

1
试剂名称：50XTAE
所需药品及剂量：Tris碱 242g，加蒸馏水至600ml，加冰乙酸57.1mL、0.5mol/L EDTA(PH8.0)100mL,定容至1L,分装灭菌。
操作过程：无特殊
应用范围：DNA 电泳缓冲液
保存期限及温度：高温灭菌后，室温保存
2.
试剂名称：10%过硫酸铵
所需药品及剂量：过硫酸铵 1g溶解于终量为10ml的水中。
操作过程：无特殊
应用范围：SDS-PAGE
保存期限及温度：4度保存
3.试剂名称：10 mg/ml 溴化乙锭（EB）
所需药品及剂量：溴化乙锭 1g, 加100 ml的水，磁力搅拌至充分溶解，然后转移至用铝箔包裹的棕色瓶中。
操作过程：有毒，小心。
应用范围：DNA电泳
保存期限及温度：室温保存。
4.试剂名称：Bradford 贮存溶液
所需药品及剂量：100ml 95%乙醇，200ml 88% 的磷酸，350 mg Serva Blue G-250。
操作过程：无特殊
应用范围：蛋白浓度检测
保存期限及温度：4度保存。 [s:14]
 [s:14]

lengyu 发表于 2007-3-30 11:08

核酸杂交用相关试剂
1
   试剂名称：DNA 变性缓冲液（1.5M NaCL, 0.5M NaOH）
所需药品及剂量：NaCl（MW58.44）  87.7g
            NaOH 20g
            去离子水至    1000 ml
   操作过程：无特殊要求
应用范围：DNA杂交
保存期限及温度：高温灭菌后，室温保存

2
试剂名称：预杂交/杂交液（6倍SSC ，5倍Denhardt‘s， 0.5% SDS(W/V), 100ug/ml
                     Salmon DNA）
所需药品及剂量：20倍SSC             30ml
            50倍Denhardt‘s    10ml
            10% SDS(W/V),       5ml
            10mg/ml Salmon DNA 1ml
               去离子水至             54 ml
   操作过程：无特殊,混匀后过0.45um滤膜滤除杂质
应用范围：DNA杂交
保存期限及温度：室温保存

3
   试剂名称：20倍SSC  （3.0 M NaCl, 0.3 M柠檬酸钠）
所需药品及剂量： NaCl       175.3g
               柠檬酸钠.2H2O  88.2g
               去离子水至 800ml
               滴加14N HCl，调节PH到7.0,加去离子水定容1L
      操作过程：高温高压灭菌
   应用范围：DNA杂交
保存期限及温度：室温保存

4
   试剂名称：50倍Denhardt‘s溶液（1%（w/v ）Ficoll400,1%（w/v ）
         polyvinylpyrrolidone,1%（w/v ）BSA）
所需药品及剂量：Ficoll400             5g
            polyvinylpyrrolidone 5g
            BSA                   5g
            去离子水至       500ml
   操作过程：混匀后过0.45um滤膜滤除杂质，分装每份25ml
   应用范围：DNA杂交
保存期限及温度：-20度保存，

wbhann 发表于 2007-3-30 11:30

1.
试剂名称：30％丙烯酰胺
所需药品及剂量：29 g丙烯酰胺和1 g N，N'－亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60 ml的水中。加热至
      37℃溶解，补加水至终体积100 ml，用Nalgene滤器（10.45 mm孔径）过滤除
         菌，查证该溶液PH值应不大于7.0。
操作过程：有毒，操作带手套
应用范围：SDS-PAGE
保存期限及温度：置棕色瓶中，4度保存
2.
试剂名称：5xTris-甘氨酸电泳缓冲液
所需药品及剂量：15.1g Tris碱，94g甘氨酸，50ml 10％(W/V) SDS溶于900ml水中，定容至1L
操作过程：无特殊操作
应用范围：SDS-PAGE
保存期限及温度：室温保存。
3.
试剂名称：电转移缓冲液
所需药品及剂量：称取2.9g甘氨酸、5.8g Tris碱、0.37g SDS，加入200ml甲醇后加水定容至1L
操作过程：无特殊操作
应用范围：Westernblotting
保存期限及温度：室温保存。
4.
试剂名称：2×SDS 凝胶上样缓冲液
所需药品及剂量：100mmol/L Tris•Cl（pH6.8）、200mmol/L DTT、4％SDS、0.2％溴酚兰及20％甘油，其中DTT为每次临用前由1mol/L母液现加现用.
操作过程：无特殊操作
应用范围：SDS-PAGE
保存期限及温度：室温保存。


lengyu 发表于 2007-3-30 11:37

核酸杂交用相关试剂2
1
试剂名称：鲑鱼精DNA（10mg/ml Salmon DNA）
所需药品及剂量及操作过程：
      称取鲑鱼精DNA 2g 于500ml烧杯，加入约200ml TE BUFFER
            磁力搅拌室温搅拌2-4小时，溶解后加入4ml的5M NaCl，使其终浓度为0.1M
            酚仿抽提，回收后用17号注射针头快速吸打溶液约20次切断DNA
            加入无水乙醇沉淀，离心收集沉淀后溶于100ml的去离子水，测定OD260
            计算DNA浓度后稀释至10mg/ml，煮沸10分钟，
  应用范围：DNA杂交
保存期限及温度：分装小分，-20保存，使用前沸水5分钟，迅速冷却

2
试剂名称：膜转移缓冲液
所需药品及剂量：Glyine  2.9g
            Tris 5.8g
               SDS 0.37g
操作过程：称取上试剂于1L烧杯，加入600ml去离子水，搅拌溶解，定容至800ml，加入200ml甲醇
应用范围：Western杂交
保存期限及温度：室温保存

3
试剂名称：TBST Buffer
所需药品及剂量：Nacl 8.8g, 1M Tris-Hcl(ph8.0)  20ml
操作过程：称取上试剂于1L烧杯，加入800ml去离子水，搅拌溶解，加入0.5mlTween20混匀后加去离子水定容至1L
应用范围：Western杂交
保存期限及温度：4度保存

4
试剂名称：封闭缓冲液
所需药品及剂量：脱脂奶粉 5g
            TBST 100ml
操作过程：称取脱脂奶粉 5g 溶于100ml TBST，搅拌混匀溶解
应用范围：Western杂交
保存期限及温度：4度保存待用（本封闭液应现配现用）

lengyu 发表于 2007-4-2 16:33

病毒空斑相关试剂
1试剂名称：中性红（0.1%）
所需药品及剂量：中性红  0.1g
操作过程：0.1g 中性红溶于100ml PBS中，过滤除菌（0.22um）
应用范围：细菌染色，空斑纯化（将活细胞染成红色，而病变细胞不着色）
保存期限及温度：4℃，避光。

2试剂名称：1.6%低熔点琼脂
所需药品及剂量：琼脂  1.6g
操作过程：1.6g 琼脂溶于100ml 三蒸水中，高压灭菌
应用范围：空斑纯化（覆盖细胞，固定病变细胞，防止病毒通过细胞液感染其他细胞）
保存期限及温度：室温保存

3试剂名称：2倍的DMEM（无酚红）
所需药品及剂量：无酚红的DMEM粉末13.4g
            三蒸水450ml
操作过程：无酚红的DMEM粉末13.4g溶于450ml三蒸水，溶解后加入3.7g NaHCO3,用1mol/lHCL调PH至7.0，定容500ml，0.22um滤膜过滤，使用前加入血清至终浓度6%
应用范围：空斑纯化
保存期限及温度：室温保存

4试剂名称：PBS
所需药品及剂量：Nacl  8g, kcl 0.2g, NaHPO4 1.15g, KH2PO4 0.2g, MgCl2 0.1g,
            CaCl2  0.1g
操作过程：依次称取上述试剂，加入800ml 三蒸水中，以HCL 调节PH至7.4，高压灭菌
应用范围：空斑纯化（清洗细胞表面，去除杂质，为下一步覆盖琼脂作准备）
保存期限及温度：室温保存

wbhann 发表于 2007-4-3 17:36

试剂配方
1
试剂名称：TFB1
所需药品及剂量：100 mM RbCl，50mM MnCl2，30 mM KAc，10 mM CaCl2，12％ glycerol，调至pH 5.8。
操作过程：无特殊操作过程
应用范围：感受态的制备试剂
保存期限及温度：-70度，长期保存。
2
试剂名称：TFB2
所需药品及剂量：10 mM MOPS，10 mM RbCl，75 mM CaCl2，12％ glycerol，用KOH调至pH 6.5。
操作过程：无特殊操作过程
应用范围：感受态的制备试剂
保存期限及温度：-70度，长期保存。
3
试剂名称：染色液
所需药品及剂量：乙醇：冰乙酸：灭菌水＝9：2：9＋0.25％考马斯亮兰。
操作过程：无特殊操作过程
应用范围：蛋白胶染色
保存期限及温度：室温保存。
4
试剂名称：脱色液
所需药品及剂量：脱色液I：乙醇：冰乙酸：灭菌水＝25：8：65（脱色用）。
 脱色液II：乙醇：冰乙酸：灭菌水＝10：15：75（保存用）。
操作过程：无特殊操作过程
应用范围：蛋白胶脱色
保存期限及温度：室温保存。  

chong2004 发表于 2007-4-25 15:44

电转化液,复苏液,培养基
（1）15%甘油去离子水
将15ml的纯甘油加入85ml的去离子水中，反复颠倒混匀，高压灭菌，4℃保存备用。
（2）SOC复苏培养基
按下列比例配制：1%蛋白胨，0.5%酵母提取物，1%氯化钠加蒸馏水配成基础培养基后，再添加0.01M的氯化镁，0.01M的硫酸镁，20mM的葡萄糖，10mM的氯化钠，2.5mM的氯化钾，加蒸馏水完全溶解后，高压灭菌，4℃保存
(3)  LB培养基
细菌培养用胰化蛋白胨  10g
细菌培养用酵母提取物  5g
NaCl          10g
ddH2O          至1000ml
搅拌加热至完全溶解，用5mol/L NaOH调节至pH7.2, 高压灭菌，4℃保存备用。固体培养基按1.5%比例加入琼脂粉再高压灭菌冷却到40℃-50℃倾注平板。
（4）低盐LB培养基
细菌培养用胰化蛋白胨  10g
细菌培养用酵母提取物  5g
NaCl          5g
ddH2O          至1000ml
搅拌加热至完全溶解，用5mol/L NaOH调节至pH7.2, 高压灭菌，4℃保存备用。固体培养基按1.5%比例加入琼脂粉再高压灭菌冷却到40℃-50℃倾注平板。
备用

[color=red]请按格式发帖，谢谢合作，改格式后加分！——tommy21[/color]

gpy010921504 发表于 2007-5-2 00:20

一.常用贮液与溶液
1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA•2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。
1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20℃。
1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2•6H2O于足量的水中，定容到100ml。
100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20℃。
20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。（配制过程中要戴手套）
5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。
10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。
10％SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。
2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。
100％三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）
2.5％ X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：溶解25mg的X－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20℃。

gpy010921504 发表于 2007-5-2 00:21

100×Denhardt试剂（Denhardt's regent）:
配制100ml溶液各成分的用量:2%聚蔗糖（Ficoll，400型）2g,2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2g,2%BSA（组分V）2g,加水至总体积为100ml,过滤除菌及杂质，分装成小份于-20℃贮存。
10×标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer):
配制10ml溶液各成分的用量: Tris-HCl 5ml 1mol/L 贮液,MgCl2 1ml 1mol/L 贮液, DTT 1ml 1mol/L 贮液,ATP 200ul 100 mmol/L 贮液,盐酸亚精胺（可选）50ul 1 mmol/L 贮液, BSA（组分V）（可选）0.5ml 10 mg/mL 贮液,水2.25ml.将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20℃ 。

chuan560 发表于 2007-5-3 09:17

几种常用染色液的配制
1、
试剂名称：姬姆萨-瑞特氏染液
所需药品及剂量：姬姆萨染料0.03克  瑞特燃料0.3克  甲醇100ML
操作过程：把两种染料放乳钵中磨细研匀，然后边研边滴加甲醇。放入瓶内加塞，事温过夜，次日用滤纸滤过。
应用范围：染料（如附红体的染色等）
保存期限及温度：棕色细口磨口瓶中保存
2、
试剂名称：碱性美蓝(亦称骆氏美蓝)染色液
所需药品及剂量：美蓝饱和酒精溶液30ml  0.01%氢氧化钾水溶液
操作过程：取美蓝饱和酒精溶液30ml,加入0.01%氢氧化钾水溶液100ml,混合即成
应用范围：染料
保存期限及温度：此液密闭可长期保存
3、
试剂名称：革兰氏碘溶液
所需药品及剂量：2g碘化钾  蒸馏水  1g碘片
操作过程：取2g碘化钾置乳钵中,加蒸馏水约5ml,使之完全溶解.再加1g碘片,研磨,并加水.待完全溶解后,置于瓶中,加蒸馏水至300ml即成
应用范围：染料
保存期限及温度：可保存半年,产生沉淀或褪色后即不能使用
4、
试剂名称：鲁格尔氏碘溶液
所需药品及剂量：3g碘化钾 2g碘片  蒸馏水
操作过程：配制方法同革兰氏碘溶液,差别仅为300ml蒸馏水中含碘化钾3g,碘片2g.
应用范围：染料
保存期限及温度：可保存半年,产生沉淀或褪色后即不能使用
5、
试剂名称：稀释石炭酸复红染液
操作过程：取3%复红酒精溶液10ml,加入5%石炭酸水溶液90ml,混合过滤,然后再用蒸馏水作10倍稀释即成
6、
试剂名称：草酸铵结晶紫染色液
操作过程：取结晶紫饱和酒精溶液2ml,加蒸馏水18ml,再加入1%草酸铵水溶液80ml,混合过滤即成

chuan560 发表于 2007-5-7 13:02

酶联免疫吸附实验中的相关试剂
1、
试剂名称：包被液（PH9.6磷酸盐缓冲液）
所需药品及剂量：NaHCO3 1.46克  碳酸钠0.8克  蒸馏水500ml
操作过程：无特殊操作过程（混合后需要调PH）
应用范围：酶联免疫吸附
保存期限及温度：常温保存
2、
试剂名称：Tris溶液
所需药品及剂量： Tris2.42克  Tween20 0.5ml  蒸馏水 1000ml
操作过程：无特殊操作过程（混合后需要调PH）
应用范围：酶联免疫吸附
保存期限及温度：常温保存
3、
试剂名称：底物溶液（OPD）
所需药品及剂量： Na2HPO4 28.4g/L 柠檬酸19.2g/L
操作过程：使用的时候现配，使用时取Na2HPO4液体12.85ml，柠檬酸液12.15ml混合，然后加25ml蒸馏水，再加30% H2O2  0.075ml
应用范围：酶联免疫吸附
保存期限及温度：常温保存
4、
试剂名称：硫酸终止液
所需药品及剂量：浓硫酸  蒸馏水    H2SO4：H2O=1：8
操作过程：无特殊操作过程
应用范围：酶联免疫吸附
保存期限及温度：常温保存
5、
试剂名称：PBS（稀释血清SPA）
所需药品及剂量： Na2HPO4.12H2O 11.94克/500ml 2O KH2PO4  4.54克/500ml H2O
操作过程：使用的时候现配，Na2HPO4 86.8ml + KH2PO4 13.2 ml
应用范围：酶联免疫吸附
保存期限及温度：常温保存

mollyzhang 发表于 2007-8-18 17:49

LB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨 10g;酵母提取物 5g;氯化钠 10g.如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
SOB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨 20g;酵母提取物 5g;氯化钠 0.5g;1 mol/L 氯化钾 2.5ml ,用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。
SOC培养基
成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。
TB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨 12g;酵母提取物 24g;甘油 4ml,各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。
2×YT培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨 16g;酵母提取物 10g;氯化钠 4ml,如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
YPD培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨 20g;酵母提取物 10g;葡萄糖 20g,用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。

saturn100 发表于 2007-8-26 12:47

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2×BES缓冲盐溶液
【配制方法】用总体积90ml的蒸馏水溶解 1.07g盐溶液BES[N，N-双（2-羟乙基）-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na2HPO4，室温下用HCl调节　该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成小份，保存于-20℃。

1mol/L CaCl2溶液
【配制方法】在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl2?6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20℃。
【注意】制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml，用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，然后骤冷至0℃。

2.5mol/L CaCl2溶液
【配制方法】在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCl2?6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。

1mol/L二硫苏糖醇（DTT）溶液
【配制方法】用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。
【注意】DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。

脱氧核苷三磷酸（dNTP）溶液
【配制方法】把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/l Tris碱分别调节　每一dNTP溶液的pH值7.0（用pH试纸检测），把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释，在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度，然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP，分装成小份贮存于-70℃。

碱基波长（nm）消化系数（ε）[L/（mol×cm）]

A    259       1.54×104

G    253       1.37×104

C    271       9.10×103

T    260       7.40×103

　　比色杯光径为1cm时,吸光度=εM

0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液
【配制方法】在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节　溶液的pH值至8.0（约需20g NaOH颗粒）然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。
【注意】EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0，才能完全溶解。

溴化乙锭（10mg/ml溶液）
【配制方法】在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。
【注意】小心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。

2×HEPES缓冲盐溶液
【配制方法】用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO4?2H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES，用0.5mol/l NaOH调节pH值至7.05，再用蒸馏水定容至100ml。用0.22μm滤器过滤除菌，分装成5ml小份，贮存于-20℃。

IPTG溶液
【配制方法】IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量为238.3），在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后，用蒸馏水定容至10ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。

1mol/L乙酸镁溶液
【配制方法】在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁，用水定容至1L过滤除菌。

1mol/L MgCl2溶液
【配制方法】在800ml水中溶解203.4g MgCl2?6H2O，用水定容至1L，分装成小份并高压灭菌备用。
【注意】MgCl2极易潮解，应选购小瓶（如100g）试剂，启用新瓶后勿长期存放。

β-巯基乙醇（BME）溶液
【配制方法】一般得到的是14.4mol/L溶液，应装在棕色瓶中保存于4℃。
【注意】BME或含有BME的溶液不能高压处理。

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