药代动力学研究中关于线性范围中最低浓度点的确定问题 转自dxy
1)在药代动力学的方法学中 关于最低浓度点是不是就是最低定量限呢?如何确定这个点的浓度呢?2)生物药品分析中,药物的浓度如何计算?比如我配置的标准品溶液浓度为
0.05ug/mL,0.2ug/mL等系列浓度,取1mL组织均浆,加入.05ug/mL标品0.2mL,此时,浓度是不是应该是0.0083ug/mL?如果此时是最低定量限的话,最低定量浓度是不是0.0083ug/mL? 谢谢! )在药代动力学的方法学中 关于最低浓度点是不是就是最低定量限呢?如何确定这个点的浓度呢?
按指导原则要求工作曲线最低浓度点满足药物代谢3-5个T1/2后的浓度，或者达到Cmax浓度的1/20就可以了。定量限是通过信噪比算出来的。工作曲线最低浓度一定要大于或者等于定量限。当然这两个数值越接近，结果的稳定性就会越差。
2)生物药品分析中,药物的浓度如何计算?比如我配置的标准品溶液浓度为
0.05ug/mL,0.2ug/mL等系列浓度,取1mL组织均浆,加入.05ug/mL标品0.2mL,此时,浓度是不是应该是0.0083ug/mL?如果此时是最低定量限的话,最低定量浓度是不是0.0083ug/mL?
.05ug/mL*0.2mL/1mL=0.01ug/mL，为何是0.0083ug/mL？是刨去碱基或者酸根的游离药物浓度么？你所说的这个0.0083ug/mL准确的说法是定量下限=工作曲线最低点 chic wrote:
1)在药代动力学的方法学中 关于最低浓度点是不是就是最低定量限呢?如何确定这个点的浓度呢?
按指导原则要求工作曲线最低浓度点满足药物代谢3-5个T1/2后的浓度，或者达到Cmax浓度的1/20就可以了。定量限是通过信噪比算出来的。工作曲线最低浓度一定要大于或者等于定量限。当然这两个数值越接近，结果的稳定性就会越差。
根据指导原则解释,定量下限是标准曲线上的最低浓度点，表示测定样品中符合准确度和精密度要求的最低药物浓度。
指导原则要求做定量下限,不要求做最低定量下限,最低定量下限是通过信噪比S/N>10做出的定义...
定量下限不是最低定量下限...少了两个字,意义就改变了 我不同意上述说法。中文版的指导原则中，虽然是写的定量下限，但是后面跟着一个括号，里面是 Lower Limit of Quantitation, LLOQ，翻译过来就是最低定量下限了。你认为“指导原则要求做定量下限,不要求做最低定量下限,最低定量下限是通过信噪比S/N>10做出的定义...”，但是我翻了几遍中文版的指导原则，里面并没有提到用S/N来确定最低定量下限的定义。
看过一些文献，有用S/N>10的，有用S/N>8的，也有用S/N>5来确定最低定量下限的，所以，我也曾经很困惑。后来上网查到了美国FDA的 Guidance for Industry——Bioanalytical Method Validation，里面关于LLOQ的条款如下：
Lower Limit of Quantification(LLOQ)
The lowest standard on the calibration curve should be accepted as the limit of quantification if the following conditions are met:
1.The analyte response at the LLOQ should be at least 5 times the response compared to blank response.
2.Analyte peak(response) should be identificale,discrete, and reproducible with a precision of 20% and accuracy of 80-120%.
从这里我们可以看出，只要信噪比S/N>5,就可以用来作为最低定量下限，但最低定量下限不一定非得用S/N=5的点，而是你确定的标准曲线的最低浓度点。所以，中文指导原则的定量下限、标准曲线的最低浓度点和最低定量下限，其实是相同的。看过FDA的指导原则后，你就会明白，中文版的指导原则，应该是从它翻译过来的，只是有的地方翻译的不完全和不规范，导致我们看指导原则后，会有这样的误解。
btw:去年我对定量下限和最低定量下限的认识也跟你一样，有一次在你们公司跟小张也说过你上面那一段话，呵呵。后面查了FDA的指导原则，才纠正过来。 同意上述 的观点。
1）今天查了一些书，线性范围中的浓度下限是可以满足测定3－5个半衰期的原药或代谢物的药物浓度测定。并不一定是S/N>10，有可能是大于10，有可能是稍微小于10，只要线性良好就可以。
2）灵敏度一项中，测定灵敏度一般就是线性中的最低浓度点浓度。没有必要再摸信噪比为10时的浓度。 个人理解：
定量下限或者最低定量下限，应该是指你所要进行的检测试验所要进行定量的范围的下限，也就是你设计的标准曲线的最低点。它是你由你设计的标准曲线的最低点决定的。
而定量限（S/N>10或者S/N>5，）应该是指通用的一个概念，是指你建立的检测方法能够定量测定你所要检测物质的最低浓度。它是你确定标准曲线最低点的一个依据。也就是说通常情况下，你所要设计的标准曲线最低点要高于或等于该方法对该物质测定的定量限，才能保证能准确的测定其浓度。应该是一个设计标准曲线最低点的一个参考值。
在设计一个标准曲线浓度范围时，要同时考虑：
1.工作曲线最低浓度点满足药物代谢3-5个T1/2后的浓度，或者达到Cmax浓度的1/20
2.测定所建立方法的定量限（S/N>10或者S/N>5，），检测限S/N>3
3.看1中计算的最低浓度是否高于你建立的方法的定量限，如果你定量限达不到，那就要重新摸索检测方法了。如果能达到，一般设定定量限的浓度为标准曲线的最低点，也就是测定该物质的最低定量限。 1)在药代动力学的方法学中 关于最低浓度点是不是就是最低定量限呢?如何确定这个点的浓度呢?
我的意见：最低浓度点就是最低定量限（LLOQ），这个浓度需要根据建立方法的目的而定，如果是想进行临床试验，则至少需要满足两个要求：
a）Cmax的1/10-20或AUCt占AUC无穷的80%以上，目的是检验分析方法是否可以成功用于临床试验样本测定。
b) S/N至少大于5（用于定量），目的是检验分析方法的能力是否可以达到此点。
2)生物药品分析中,药物的浓度如何计算?比如我配置的标准品溶液浓度为
0.05ug/mL,0.2ug/mL等系列浓度,取1mL组织均浆,加入.05ug/mL标品0.2mL,此时,浓度是不是应该是0.0083ug/mL?如果此时是最低定量限的话,最低定量浓度是不是0.0083ug/mL? 谢谢!
我的意见：你的算法和结果对，没错
1)药代实验方法学中,灵敏度一项中,测定灵敏度应该写最低定量限浓度还是线形中的最低浓度点呢?
这里存在一个误区：灵敏度和定量下限、检测限概念的混淆。
灵敏度是指所建方法对于特定化合物的响应情况，灵敏度越高，其浓度从0.1至1 ng/mL的响应值变化就越大。
定量下限Newphy战友已说的很明白了，定量所用标准曲线的最低浓度点，方法学要求其S/N大于5，但可以很高。
检测限，用于定性要求S/N大于3，用于定量S/N大于5，目前偏重于前者。
综上，有时可能会出现这样的化合物：检测限浓度很高，但浓度从0.1至1 ng/mL的方法响应值变化值确很大（即灵敏度高）。即：灵敏度和检测限并不一定相关。但目前大家都认为灵敏度代表这个方法的检测探底能力，所以大家就当听之而已。
另外，无论FDA还是SFDA均无要求写灵敏度一项（其实灵敏度也意义不大，方法不在高，能用即可）。
2)我觉得最终浓度是: 0.05ug/mL*0.2/(1.0+0.2) =0.0083ug/mL.有的人在加入标准品后是把标品溶液先吹干（然后用血浆复溶吗？）,这样计算的浓度应该是
0.05ug/mL*0.2mL/1mL=0.01ug/mL.如不吹干,直接把标品溶液加入到1mL组织均浆中,应该是象我上面计算的那样,是吗?
如果复溶，你的算法没错。 关于定量下限（LOQ）、最低定量限（LLOQ）、最低检测限（LOD）的一些问题探讨：
看到大家讨论这么激烈，我也说说我自已的一些看法吧：
１）定量下限（LOQ）即为工作曲线最低点浓度，这个是根据实际情况确定的。如：实际血药浓度时间曲线达峰200ng/ml，药审要求测到峰浓度的1/10~1/20，我定量下限（也就是工作曲线最低点）可设定为10ng/ml足够了，若我的方法此时可定量更低，比如1ng/ml（S/N>10，最少5），此时定量下限（10ng/ml）与最低定量限（1ng/ml）不同。当然了，最主要看你作方法确证的时候选那个为最低，你也可以选工作曲线最低点如1ng/ml，那你方法的定量下限与最低定量限一致，均为１ng/ml。根据上面的情况，可以这样说：用设定的方法测定实际药物浓度进，低于最低定量限时，测定误差肯定会>20%，低于定量下限的可能会>20%（仅可能），但两者测定结果均不可用。
上述两个参数均为样品处理完后上样结果，不用考虑绝对浓度和绝对进样量。是用来描述所建立方法的性质。
２）最低检测限（LOD）：此参数考虑为绝对浓度，取标准系列溶液，进行不同浓度进样，直到S/N＝３，此时的浓度为最低检测限，是绝对浓度，它表示的是此检测器对于检测此种化合物的最低检测限，其实，可以根据进样量和进样浓度计算出绝对进样量，此值更能准确表示此检测器对此化合物的检测能力，是用来描述检测器对此化合物性质的参数。
３）关于相对药物浓度：此问题在作方法的时候经常遇到，一般情况是这样的。假设我配制的标准系列溶液（甲醇）浓度为1、3、10、30、100ng/ml，我前处理方法是200ul空白血，100ul标准系列，内标等处理正常，则工作曲线的实际浓度应为0.5、1.5、5、15、50ng/ml。折算方法是将标准系列的溶质算如以空白血浆为溶剂的浓度，就是标准系列中的溶质相对于空白血浆体积的浓度。当然了，此作方主要是为平行实际血样处理的方法，此时的实际血样处理如下：200ul空白血，加100ul甲醇，内标等处理正常。
当然了，此时的名称也有所区别了，如果标准系列溶液与最后浓度一致，我们一般都称标准曲线。如若不一致，我们称处理后的曲线为工作曲线。
上述是和一些朋友共同讨论再加上一直在作这方面试验的结果，分享与大家共同讨论。1楼朋友的问题主要是上面所说的第三种情况，相对浓度应为0.01ng/ml。 "1)在药代动力学的方法学中 关于最低浓度点是不是就是最低定量限呢?如何确定这个点的浓度呢?"
问题1已经很清楚了.
"2)生物药品分析中,药物的浓度如何计算?比如我配置的标准品溶液浓度为
0.05ug/mL,0.2ug/mL等系列浓度,取1mL组织均浆,加入.05ug/mL标品0.2mL,此时,浓度是不是应该是0.0083ug/mL?如果此时是最低定量限的话,最低定量浓度是不是0.0083ug/mL? 谢谢!"
问题2涉及到样品处理方法,如果是沉淀蛋白后上清直接进样分析, 此时实际进样溶液的浓度未知,因为1mL组织匀浆沉淀离心后上清液体积未知.
如果是提取液浓缩或稀释定容后,或者挥干提取液体后定量加入溶剂再进样分析,此时实际进样浓度应根据定容体积计算.
但不论如何,我们所要表达的都应该是组织样品中被分析物的浓度,而不是实际进样时溶液的浓度,实际进样浓度与我们所要表达的无关, 故浓度应为被分析物在组织中的浓度,既0.01ng/ml. 1.在药代动力学的方法学中 关于最低浓度点是不是就是最低定量限呢?如何确定这个点的浓度呢?
同意"Newphy"的说法,标准曲线的最低点就是定量限.请讨论的同志们注意定量限的定义:定量限 (LOQ)是指在保证具有一定可靠性(一定准确度和精密度)的前提下，分析方法能够测定出的样品中药物的最低浓度。 既然是定量限已经是最低浓度了,那还来什么最低定量限呢?请"huzf1105"战友注意,最低定量限的说法不够严密,定量限就行了.
从定量限的定义来看,它要求的药物浓度有两个要件:1.具有一定准确度(通常允许测定值与实际值之间有20%的误差)和精密度;2.满足第1个条件下的最低药物浓度. 因此可以说标准曲线的最低点就能满足这一要求.
至于确定定量限的方法也因所用方法不同而异。当用仪器分析方法时，往往将多次空白试验测得的背景响应的标准差(即空白标准差)乘以10，作为定量限的估计值，继之，再通过分析适当数量已知接近定量限或以定量限制备的样品来验证。
本人认为,你作出标准曲线后,可以将其最低浓度作为定量限,该定量限在这时已有的条件下肯定不会错,但不能保证就一定是"最低浓度"的定量限,你可以按上述方法进一步去得到"最低浓度"的定量限,但我认为没有必要,除非你想做方法学研究,因为标准曲线的最低点已可以满足你的方法学的定量限要求了(当然你应该预先估计好你的标准曲线能涵盖你的样品浓度范围).
2.生物药品分析中,药物的浓度如何计算?比如我配置的标准品溶液浓度为
0.05ug/mL,0.2ug/mL等系列浓度,取1mL组织均浆,加入.05ug/mL标品0.2mL,此时,浓度是不是应该是0.0083ug/mL?
很简单的问题,此时浓度不是0.0083ug/mL.因为生物药品分析中的浓度均指生物基质中含有药物的浓度.此时的浓度应该是药物溶质的量/生物基质的体积,如上例,组织匀浆中药物浓度应该是0.05ug/mL×0.2mL/1mL=0.001ug/mL.
页:
[1]