中和反应技术(Neutralization test technique)
<p>病毒或毒素与相应的抗体结合后，失去对易感动物的致病力，谓之中和试验。本试验主要用于：①从待检血清中检出抗体，或从病料中检出病毒，从而诊断病毒性传染病；②用抗毒素血清检查材料中的毒素或鉴定细菌的毒素类型；③测定抗病毒血清或抗毒素效价；④新分离病毒的鉴定和分型，中和试验不仅可在易感的实验动物体内进行，亦可在细胞培养上或鸡胚上进行。试验方法主要有简单定性试验、固定血清稀释病毒法、固定病毒稀释血清法、空斑减少法等。 <br />（一）简单定性中和试验 <br />本法主要用于检出病料中的病毒，亦可进行初步鉴定或定型。先根据病毒易感性选定试验动物（或鸡胚、细胞培养）及接种途径。将病料研磨，并稀释成一定浓度（约100LD<sub>50</sub>～1000LD<sub>50</sub>或TCID<sub>50</sub>）。污染的病料需加抗生素（青霉素、链霉素各200～1000单位），或用细菌滤器过滤，与已知的抗血清（适当稀释或不稀释）等量混合，并用正常血清加稀释病料作对照。混合后置37℃1h，分别接种实验动物，每组至少3只。分别隔离饲喂，观察发病和死亡情况。对照动物死亡，而中和组动物不死，即证实该病料中含有与该抗血清相应的病毒。本法亦可用于毒素（如肉毒毒素）的鉴定和分型。 <br />（二）固定血清稀释病毒法 <br />本法多将病毒作10倍递增稀释，分置2列试管，第一列加正常血清（对照组），第二列加待检血清（试验组）。混合后，置37℃作用1h，将各管混合液分别接种选定的试验动物，每一稀释度用3～5只动物。接种后，逐日观察，并记录其死亡数，观察结束后，计算LD<sub>50</sub>和中和指数（表7-1、表7-2），本法适用于大量检样的检测。 <br />表7-1固定血清稀释病毒法术式<br /><object codebase="http://download.macromedia.com/pub/shockwave/cabs/flash/swflash.cab#version=5,0,0,0" height="320" width="554" classid="clsid:D27CDB6E-AE6D-11cf-96B8-444553540000"><param value="14658" name="_cx" /><param value="8467" name="_cy" /><param name="FlashVars" /><param value="/bio101/UploadFiles/200610/20061015124001638.swf" name="Movie" /><param value="/bio101/UploadFiles/200610/20061015124001638.swf" name="Src" /><param value="Window" name="WMode" /><param value="-1" name="Play" /><param value="-1" name="Loop" /><param value="High" name="Quality" /><param name="SAlign" /><param value="-1" name="Menu" /><param name="Base" /><param name="AllowScriptAccess" /><param value="ShowAll" name="Scale" /><param value="0" name="DeviceFont" /><param value="0" name="EmbedMovie" /><param name="BGColor" /><param name="SWRemote" /><param name="MovieData" /><param value="1" name="SeamlessTabbing" /><param value="0" name="Profile" /><param name="ProfileAddress" /><param value="0" name="ProfilePort" /><param value="all" name="AllowNetworking" /><param value="false" name="AllowFullScreen" /></object><br />表7-2固定血清稀释病毒法中和试验（例一）<br /><img style="ZOOM: 80%" height="131" src="experiment/UploadFiles_3501/200610/2006101918422821.gif" width="497" border="0" /><br />注：［1］分母为接种数，分子为死亡数； <br />［2］LD<sub>50</sub>计算见实例。 <br />中和指数＝中和组LD<sub>50</sub>/对照组LD<sub>50</sub>=10<sup>-2.2</sup>/10<sup>-5.5</sup>=10 <sup>3.3</sup> </p><p>查3.3反对数是1.995，故中和指数10 <sup>3.3</sup>＝1.995。也就是说该待检血清中和病毒的能力为正常血清的1.995倍。本法多用以检出待检血清中的中和抗体，对病毒而言，通常中和指数大于50者判为阳性，10～49为可疑，小于10为阴性。 <br /><br />（三）固定病毒稀释血清法 <br /><br />本法用以测定抗病毒血清的中和价，将待检血清2倍递增稀释，加等量已知毒价的病毒液（与血清混合后，每一接种剂量含病毒100LD<sub>50</sub>），摇匀后，置37℃作用1h，接种实验动物（表7-3）。<br /><br />表7-3固定病毒稀释血清中和试验(例二)<sup> [1]<br /><br /><img style="ZOOM: 50%" height="153" src="experiment/UploadFiles_3501/200610/2006101918423287.gif" width="555" border="0" /><br /></sup>注：[1]接种剂量0.1ml，含病毒100LD<sub>50</sub>； <br />[2]系指与病毒混合后的稀释度； <br />[3]分母为接种数，分子为保护数； <br />[4]PD<sub>50</sub>为半数保护，其计算法同LD<sub>50</sub>的计算。 <br />（四）空斑减少法 <br />在细胞培养上进行病毒中和试验，近年来多采用空斑减少法。先将病毒稀释成适当浓度，使每0.2ml含80个～100个PFU（空斑形成单位），与不同稀释度的待检血清等量混合，置37℃作用1h～2h，分别测定PFU，使空斑减少50％血清稀释度即为该血清的中和价。见表7-4。 <br />表7-4空斑减少法中和试验示例<br /><img style="ZOOM: 60%" height="257" src="experiment/UploadFiles_3501/200610/2006101918424621.gif" width="524" border="0" /><br />注：[1]血清用4倍递增稀释； <br />[2]空斑减少50％的血清稀释度，其计算法同LD<sub>50</sub>的计算。<br /></p>页:
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