样品制备
样品制备是NMR技术的基础。良好的开端，是成功的一半。因此，样品制备的好坏NMR分析测试的关键。准备核磁样品时，一般要准备核磁管、氘代溶剂这个大家都是知道的，现在一般用的
都是5MM的核磁管；关于氘代试剂很多人问我有什么用，我在这里简单的说一下：
现在的磁体都是超导的，磁体不会绝对的稳定，可能会出现微小的变化，这种变化有时
候对实验的影响是非常大的。 我现在就以我所使用的600M谱仪为例说明一下。600M是对
于H的共振频率说的，也就是说H在磁场中的共振频率是6*10^8 ，如果磁场的变化有1/1
0^8的话，就能引起谱图上峰的6Hz的偏移，这对于一个1Hz左右的峰来说影响是非常大的
因此现在的超导核磁的谱仪上都有锁场的氘通道。通过对氘信号的检测，判断磁场的变
化，通过微小的附加电流来补偿磁场的变化。另外对于我们做的很多的H NMR来说，如果
不是用到代溶剂，溶剂峰会比样品峰大N多倍，我们就看不到样品峰了。
大家配样品时要注意以下几点：
1、样品量的问题：一般对于H NMR来说需要的量比较小，大概几个毫摩尔就可以了，对
于二维谱和碳谱浓度就要比较大，最好有几十个毫摩尔。
2、溶剂量的问题：一般样品的溶剂量应该在0.5ML，大概在核磁管中的长度为4CM左右。
溶剂量太小了会影响匀场，进而影响实验的速度，和谱图的效果；溶剂量太大了嘛，那
就太浪费了。
3、溶剂选择的问题：选择的原则是：样品易溶解，溶剂峰和样品峰没有重叠，粘度低，
并且价格便宜。大家在选择的时候主要是样品的溶解性问题。
4、核磁管的问题：首先尽量选用优质核磁管，还有就是最好不要在核磁管上乱贴标签，
这会导致核磁管轴向的不均衡，在样品旋转的时候影响分辨率，还有可能打碎核磁管造
成重大损失。
测定NMR图谱要使用氘代溶剂，这些溶剂和其中水峰的化学位移值在常见的教科书中可以方便地查阅。这里要指出的是有些类型的天然化合物需要使用特定的氘代溶剂。例如三萜皂苷和甾体皂苷最好使用氘代吡啶（pyridine-d5）作溶剂，因为文献上几乎都是采用氘代吡啶，溶剂一致不但可以消除由于溶剂效应带来的化学位移差别和峰型的差别，而且便于和文献数据比较，另一个优点是氘代吡啶的1H和13C残余信号都出现在较低场，与上述两类皂苷的绝大部分信号不发生重叠。再如黄酮苷，基本上是采用氘代二甲基亚砜（DMSO-d6），一是溶解性好，二是数据便于与文献比较，三是二甲基亚砜作为氢键溶剂可以和黄酮母核上的酚羟基缔合致使方便地鉴定酚羟基，四是溶剂信号与黄酮苷的NMR信号能很好的分离。多糖类采用重水（D2O）作溶剂测定13CNMR时没有溶剂信号的干扰，但在1HNMR中溶剂信号（4.7-4.8ppm）往往很强，这时无论1D或2D1HNMR图谱,溶剂峰都会使图谱质量变差,要改变图谱质量就需要使用水峰压制技术。当用氘代二甲基亚砜作溶剂时，在1H或13C谱上溶剂信号与多糖的信号几乎不发生重叠，这为多糖NMR图谱的解析带来方便。多糖类化合物常用的NMR溶剂是重水和氘代二甲基亚砜，在进行与文献数据对照分析时应当注意由于溶剂效应带来的化学位移差别。
用氘代二甲基亚砜或氘代吡啶作溶剂测定含醇羟基的化合物时，由于溶剂和羟基质子缔合形成氢键往往会出现以下情况：羟基质子信号分别出现在不同的位置，叔醇羟基质子为单峰，仲醇羟基质子为二重峰，而伯醇羟基质子裂分为三重峰。这种现象对鉴定羟基的类型和羟基连接的位置非常有用，如果1HNMR与HMQC和HMBC一起综合分析，你会得到令人兴奋的结果。应当注意的是样品和样品管应尽可能干燥，防止水分影响氘代溶剂和羟基质子的缔合。
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