石蜡包埋组织DNA提取的基本方法
从石蜡包埋组织中提取DNA的基本步骤，是在常规DNA提取方法的基础上改良和演变而来。Goelz等（1985）最先提出的石蜡包埋组织DNA提取技术（表18-5），是用机械的方法破碎组织，切除多余的石蜡，直接进入含SDS和高浓度蛋白酶K（1mg/ml）的提取缓冲液加温孵育，然后进行苯酚和氯仿抽提。所得DNA虽不完整，但可被限制性内切酶切割，因而适于点杂交，印迹杂交等多种分子生物学实验。Dubeau等（1986）在上述方法上作了改进。首先通过组织切片用二甲苯脱蜡，保证了组织的完全破碎，使细胞与消化液充分接触，使DNA释放和蛋白去除更加完全；其次通过两步消化的方法，将不适于做分子杂交的降解的DNA小片段去除，仅保留那些可螺旋化的完整的DNA大分子，从而提高了DNA质量，适于做Southern印迹杂交分析。Moerkerk等（1990）对上述两种方法进行了比较，发现两种方法所取得DNA之点杂交结果一致，非螺旋化DNA亦不影响杂交分析。表Gpelz氏DNA提取方法的主要步骤
1．切除多余石蜡，暴露组织
2．将组织切碎（最大径<0.5mm），称重；
3．溶于TE9提取液（组织<50mg/5ml,50～500mg/10ml）,高速混悬2～3min；于48℃放置24h，其制备见表18-6；
4．再次混悬组织，加入蛋白酶K至终浓度1mg/ml,SDS至2%，孵育40h；
5．用等体积酚-氯仿溶液抽提3次；
6．2.5倍体积乙醇沉淀DNA
7．-70℃放置2～4h
8．9000×g离心1h
9．沉淀物用70%乙醇洗1次
10．干燥，TE（pH7.2）溶解。
表TE9 DNA提取液的制备
500mmol/L Tris
20mmol/L EDTA
10mmoo/L NaCl
1% SDS
500μg/ml 蛋白酶K
PH8.0
5μm组织切片
↓
常规脱蜡、水化
↓
第一次溶液A孵育（去上清）
↓
第二次溶液A孵育（留上清）
↓
氯仿-异戊醇抽提
↓
RNA酶和蛋白酶消化
↓
酚抽提
↓
沉淀
↓
（却除未螺旋化DNA）↓
透析
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