1、 质粒名称： pSilencer™ 4.1-CMV Vectors
2、 载体类型： SiRNA真核表达载体
3、 载体抗性：Amp（氨苄青霉素）和Neo（新霉素）
4、 培养条件：37度CO2细胞培养箱
5、 其他信息：穿梭载体
6、 质粒图谱：
[img]http://images.e2002.com//images/odP91259.gif[/img]
7、 特征序列区位：SV40启动子和CMV启动子
1、 质粒名称： pMIR-REPORT™ miRNA Expression Reporter Vector System
2、 载体类型： miRNA真核表达载体
3、 载体抗性：Amp和Pur
4、 培养条件：37度CO2细胞培养箱
5、 其他信息：带有荧光素酶报告基因
6、 质粒图谱：
[img]http://images.e2002.com//images/KYJ91795.gif[/img]
7、 特征序列区位：SV40启动子和CMV启动子
[u][b]人宫颈癌HPC2基因的克隆及其原核和真核表达载体的构建 [/b][/u]
HPC2属于 Polycomb group(PeG)基因家族成 胞中获取了人 HPC2基因，并构建了原核和真核表 ，在宫颈癌组织中有大量表达…。我们的研究发 达载体 ，为深人研究奠定了基础。 ，宫颈癌组织中 HPC2基因的 C端保守序列有一 1 材料和方法 态性位点的改变，推测该位点的突变可能参与宫 1．1 主要试剂：Trizol试剂和 RT—PCR试剂盒为 癌的发生 】。为进一步研究 HPC2在宫颈癌发生 Invitrogen公司产品；限制性内切酶、T4连接酶、DNA 程中的作用 ，我们通过 RT—PCR方法从 Hela细 连接溶液Solution I、ClAP、标准分子量 DNA Marker、及克隆载体 pT7 blue Vector均购自Takara公司；质 胞、大肠杆菌 XL一10 Gold、BL一21菌株均由第四军 2．3 pCMV—Flag—HPC2真核表达载体的构建及 医大学医学遗传学与发育生物学教研室提供。 鉴定 构建的质粒用 Hind III及 Sal I酶切鉴定，得 1．2 PCR引物设计与合成 ：用源于人 HPC2 mRNA 到约4．4 kb和2．0 kb的片段，与预期结果一致(图 序列设计引物。上游引物：5 一CCA TGG AGC TGC 3)。 1 2 3 4 5 6 M CAG CTG TrG GCG AG一3 下游引物：5 一CCT CCG GCT ACA CCG TCA CGT ACT CC一3 ，引物合成由 大连 TaKaRa公司完成。 2 000 bp 1．3 RNA 的提取及 HPC2基因的扩增：按 Gibco 1 600 1)p Trizol Reagent说明书从 HeLa细胞 中提取总 RNA， 反转录成 HeLa cDNA。应用 RT—PCR试剂盒扩增 HPC2基因。总反应体积为5O l，循环参数为：94℃ DI2000 DNA Marker 5 min；95℃30 s，68℃2 min，72℃1 rain，35个循环， FIG1 PCR amplification of HPC2 gene in cervical carcinoma 再于72℃延伸7 min。取5 l PCR产物行 1％琼脂 图 1 宫颈癌 HPC2基因的扩增 糖凝胶电泳分析 。 1．4 HPC2基因序列测定：HPC2扩增产物用凝胶 回收试剂盒回收；插入克隆载体 pT7 blue中，构建 pT7一blue—HPC2；转化 XLIO gold大肠杆菌，每个 标本随机挑取 5个克隆，37℃振荡培养，小量提取质 000 600 粒 pT—HPC2；EcoR I及 Sal I双酶切鉴定，鉴定正 000 750 确的质粒交由上海基康公司进行 DNA序列测定。 500 250 1．5 pGEX4T1一HPC2原核表 达载体 的构建： pGEX4T1用 EcoR I酶切后补平，再用 Sal I酶切，回 l～4：pGEX4T1一HPC2双酶切 M，m：DNA Marker 收载体大片段；pT—HPC2用 Nco I酶切后补平，再 FiG2 Retfiction enzyme allalysis of the recombinant 用 Sal I酶切，回收 HPC2小片段。Solution I连接上 plasmid pGEX4T1一HPC2 述基因和载体片段，构建 HPC2原核表达载体，转化 圈2 质粒 pGEX4T1一HPC2酶切鉴定 XL—lO感受态细胞，用含 Amp的LB平板筛选阳性 1 2 4 111 p 克隆，小量提取pGEX4T1一HPC2质粒，Nco I及 Sal I酶切鉴定。 000
1．6 pCMV2一Flag—HPC2真核表达载体的构建： 600 pCMV2一Flag用 Hind llI酶切补平后 ，用 Sal I再次 000 750 酶切，回收载体大片段；pT—HPC2用 Nco I酶切补 500 250 平后，用 Sal I再次酶切，回收 HPC2小片段。将大 I～4：pCMV—Flag—HPC2双酶切 小片段连接，转化 ，获得 pCMV2一Flag—HPC2真核 M，m：DNA Marker 表达质粒；Hind III及Sal I酶切鉴定。 g,3 Retrictlon enzyme analysis of the recombinant 2 结果 plasmid pCMV——Flag，-HPC2 2．1 宫颈癌 HPC2基 因的扩增、克隆及序 列测定： 圈3 质粒 pCMV—Flag—HPC2酶切鉴定 HPC2基因PCR产物的电泳结果可见大小为 1 674 bp的特异性条带 (图 1)。回收片段插入 pT7 blue 3 讨论 克隆载体中，形成 pT7 blue—HPC2，EcoR I及 Sal I HPC2是 PcG家族成员，是果蝇 Polycomb蛋白 酶切鉴定得到正确克隆。克隆测序结果与 Gene— ．在人类的同源物。PcG蛋白是一个高度保守的转录 Bank的人 HPC2基因序列相一致。 抑制物家族，它不仅决定了一类发育调节基因的转 2．2 pGEX4T1一HPC2原核表达载体的构建及鉴 录模式，而且参与调节细胞周期。此外，PcG蛋白异 定：构建的质粒用 Nco I及 Sal I双酶切鉴定，得到 常的调节也是某些肿瘤发生的关键步骤 ]，如 PcG 约5 kb和 1．8 kb的片段，与预期结果一致(图2)。 蛋白家族 中 bmil等成员 已被证实参与肿瘤的发
1、 质粒名称：psiLentGene™ Vector
2、 载体类型： SiRNA真核表达载体
3、 载体抗性：Amp（氨苄青霉素）和Neo（新霉素）
4、 培养条件：37度CO2细胞培养箱
5、 其他信息：穿梭载体
6、 质粒图谱：
[img]http://images.e2002.com//images/V5K05080.jpg[/img]
7、 特征序列区位：SV40启动子和U6启动子
版主，我已经按照你的要求，将其他两个图片进行了上传修改，请过目。
若有什么不足，请与我联系。
[s:64] 谢谢兄弟支持工作，不知道兄弟有什么要求，只要我能做到，尽量满足你的需求
连看都看不懂~~~
[s:110]
1、 质粒名称： pCMVTNT(TM) Vector
2、 载体类型： 克窿基因的体外和体内表达
3、 载体抗性：Amp（氨苄青霉素）
4、 培养条件：37度CO2细胞培养箱
5、 其他信息：pCMVTNT载体可以方便地利用体内及体外表达系统表达克隆基因。SP6和T7聚合酶启动子与多克垄位点串联。可以用于体外转录/翻译想匹配的SPS或T7进行基因表达。由于噬菌体启动子的存在，可以在体外高效合成RNA。pCMVTNT载体还含有5`B-球蛋白先导序列，认为可以增强一些基因的体外表达。对于体内表达，该载体含有CMV增强子/启动子区域，可以在多种细胞类型中进行组成性表达。
6、 质粒图谱：
[img]http://images.e2002.com//images/JcL64615.gif[/img]
7、 特征序列区位：CMV启动子，多克隆位点,噬菌体f1 region
1、 质粒名称：pTARGET™
2、 载体类型：哺乳动物表达和PCR克窿载体
3、 载体抗性：Amp（氨苄青霉素）和Neo（新霉素）
4、 培养条件：37度细胞培养箱
5、 其他信息：
简化PCR克隆：“T”突出端可直接连接热稳定Taq DNA聚合酶所扩增的PCR产物
高组成型表达：用CMV增强子/启动子，可在许多细胞类型中获得高组成型表达。在转基因小鼠中，检测28种组织，在24种组织中，可测定到CMV增强子/启动子调节氯霉素乙酰转移酶基因（CAT）的表达
蓝/白筛选：容易筛选重组克隆，单酶切释放插入DNA
稳定转化子：pTARGETTM载体带有新霉素磷酸转移酶编码区，可筛选稳定转化子
6、 质粒图谱：
[img]http://images.e2002.com//images/vp665423.gif[/img]
7、 特征序列区位：SV40启动子 ,lacZ alpha ,T末端
phRL系列合成海肾萤光素酶报告基因载体
包括
phRL-null Vector
phRL-TK Vector
phRL-TK (Int-) Vector
phRL-SV40 Vector
phRL-CMV Vector
phRG-B Vector
phRG-TK Vector
1、 质粒名称： phRL系列
2、 载体类型： 哺乳动物表达,报告载体
3、 载体抗性：Amp（氨苄青霉素）
4、 培养条件：37度CO2细胞培养箱
5、 其他信息：phRL合成海肾萤光素酶 (hRluc) 报告基因载体系列包括七个载体，每个载体中插入了一个合成海肾萤光素酶序列，以利于在哺乳动物中更有效地表达海肾萤光素酶， 并减少出现异常表达行为的危险。在一系列不同的启动子和载体骨架构造中，这个系列为实验者的个别实验条件提供许多机会， 以选择最合适的对照载体，并且降低对照载体不必要表达和主要报告基因异常反式(trans)效果的危险性。
6、 质粒图谱：
phRL-null Vector为例
[img]http://images.e2002.com//images/yaR66354.gif[/img]
7、 特征序列区位：mini CMV启动子，多克隆位点,f1复制起始位点,T7,SV40,
1、 质粒名称： pEGFP-C1
2、 载体类型： 哺乳动物细胞 荧光蛋白表达
3、 载体抗性：Kan（卡那霉素）和Neo（新霉素）
4、 培养条件：37度CO2细胞培养箱
5、 其他信息：带有荧光蛋白报告基因,高效表达
6、 质粒图谱：
[img]http://images.e2002.com//images/Ymt67153.gif[/img]
7、 特征序列区位：CMV启动子，多克隆位点,f1复制起始位点,T7,SV40,
1、 质粒名称：pGeneClipTM 系列
pGeneClip™ Basic
pGeneClip™ hMGFP
pGeneClip™ Hygromycin
pGeneClip™ Neomycin
pGeneClip™ Puromycin
2、 载体类型：主要用于方便快捷地克隆人的目标序列，在人类细胞中表达短发卡RNA(shRNAs)
3、 载体抗性：Amp（氨苄青霉素）
4、 培养条件：37度细胞培养箱
5、 其他信息：
GeneClipTM 系统提供多种带有抗性标记或hMGFP基因的真核细胞载体，可进行细胞的稳定转染。hMGFP用于测定转染效率及使用FACS治龅姆椒ㄉ秆∽鞠赴
1、 质粒名称： psiCHECK™-1 , psiCHECK™-2
2、 载体类型： 起始优化RNAi
3、 载体抗性：Amp（氨苄青霉素）
4、 培养条件：37度细胞培养箱
5、 其他信息：psiCHECKTM-1 和 psiCHECKTM-2载体为起始优化RNAi提供定量而快速的工具。这些载体可以监控与报告基因融合的靶基因的表达变化。两个载体都使用了海肾萤光素酶作为主要报告基因，所研究的基因要克隆在多克隆位点上。由针对所研究基因的合成的siRNA， 或细胞内表达的shRNA所起始的RNAi过程将导致融合mRNA的切断及其降解。只要测量海肾萤光素酶活性的降低就可以方便地监控RNAi的效果。与其它融合方法相比，例如：与GFP或旗帜标签相比，海肾荧光素酶定量方法更方便快捷，灵敏度更高。psiCHECKTM 载体含有第二个报告基因，萤火虫荧光素酶，是设计来做终点裂解分析的。在psiCHECKTM-2载体中引入萤火虫荧光素酶表达归一化，获得耐用，可重复性结果。
6、 质粒图谱：
[img]http://images.e2002.com//images/j3U79730.gif[/img]
[img]http://images.e2002.com//images/HSN79781.gif[/img]
7、 特征序列区位：T7,SP6,HSV-TK 启动子,SV40
下面发点植物表达载体
1、 质粒名称：pCAMBIA-2301
2、 载体类型：植物表达双元载体
3、 载体抗性：Kan（卡那霉素）nptII(新霉素)
4、 培养条件：37度细胞培养箱
5、 其他信息：农杆菌介导,多种植物可用的双元表达载体
6、 质粒图谱：
[img]http://images.e2002.com//images/sIA81683.jpg[/img]
7、 特征序列区位：gusA，多克隆位点,35s 启动子,T-nos终止子
*** 作者被禁止或删除 内容自动屏蔽 ***
1、 质粒名称：pCAMBIA-1304
2、 载体类型：植物表达双元载体(GFP融合)
3、 载体抗性：Kan（卡那霉素）HptII( 潮霉素)
4、 培养条件：37度细胞培养箱
5、 其他信息：农杆菌介导,多种植物可用的双元表达载体,GFU::GUS融合载体
6、 质粒图谱：
[img]http://images.e2002.com//images/1P601217.jpg[/img]
7、 特征序列区位：gusA，多克隆位点,35s 启动子,T-nos终止子,GFU::GUS融合序列
1、 质粒名称：pBI121
2、 载体类型：植物表达双元载体
3、 载体抗性：Kan（卡那霉素）nptII(新霉素)
4、 培养条件：37度细胞培养箱
5、 其他信息：农杆菌介导,多种植物可用的双元表达载体
6、 质粒图谱：
[img]http://images.e2002.com//images/eL102013.jpg[/img]
7、 特征序列区位：gusA，多克隆位点,35s 启动子,T-nos终止子
1、 质粒名称：pCAMBIA-3301
2、 载体类型：植物表达双元载体
3、 载体抗性：Kan（卡那霉素）
4、 培养条件：37度细胞培养箱
5、 其他信息：农杆菌介导,多种植物可用的双元表达载体,含有Phosphinothricin(抗固杀草除草剂)基因
6、 质粒图谱：
[img]http://images.e2002.com//images/kk250392.png[/img]
7、 特征序列区位：gusA，多克隆位点,35s 启动子,T-nos终止子,Phosphinothricin(R)
1、 质粒名称：pCAMBIA-1391Z
2、 载体类型：植物表达双元载体
3、 载体抗性：Kan（卡那霉素）HptII( 潮霉素)
4、 培养条件：37度细胞培养箱
5、 其他信息：农杆菌介导,多种植物可用的双元表达载体
6、 质粒图谱：
[img]http://images.e2002.com//images/EqP53932.jpg[/img]
7、 特征序列区位：多克隆位点,35s 启动子,T-nos终止子,双GUS外显子
商用的植物表达载体实际上很少,基本上都要自己在已有载体上再加工,拟南芥一般用35s启动子
但要在玉米中应用就先要把35S启动子换成Ubiquitin,水稻中就换成Actl启动子,最后再加上自己的基因.
这里我发了几个常用的,其中pBI121和pCAMBIA-3301是我用过的,都不错.
pCAMBIA系列载体都是(CAMBIA)澳大利亚国际农业分子生物学应用中心开发的,多数研究机构都在用.有兴趣的兄弟可以查查这方面的资料.
Gateway其实就是几个PCR反应,先PCR将基因两端加上给定序列的接头,再进行BP反应
就是把基因加到pDNOR221载体上,保存好这个载体啊,以后可以直接转到你想要的任意载体上去.当然必须是invitrigen公司设计好的了
之后进行LR反应,将基因转到你需要的载体上
这套系统可干的事情很多,包括建库都变得十分简单了,缺点是费用较高(反应试剂盒差不多4,5千,十次左右)
BP反应用的载体pDNOR221
1、 质粒名称：pDNOR221
2、 载体类型：植物表达双元载体
3、 载体抗性：Kan（卡那霉素）
4、 培养条件：37度细胞培养箱
5、 其他信息：供体载体,ccdB致死基因(未被替换的菌株致死)
6、 质粒图谱：
[img]http://images.e2002.com//images/Fzh56978.png[/img]
7、 特征序列区位：T7,M13,ATTB1,ATTB2位点,ccdB基因
下面是几个LR反应用的Destination载体
1、 质粒名称：pK7GWIWG2(1),0
2、 载体类型：农杆菌介导植物表达RNAi双元载体
3、 载体抗性：Kan（卡那霉素植物中）SPC(壮观霉素细菌中)
4、 培养条件：37度细胞培养箱
5、 其他信息：Destination载体,双ccdB致死基因(未被替换的菌株致死),双ATTB1,ATTB2位点
6、 质粒图谱：
[img]http://images.e2002.com//images/ho660792.jpg[/img]
7、 特征序列区位：双ATTB1,ATTB2位点,双ccdB基因,双35spromotor
1、 质粒名称：pBGWFS7
2、 载体类型：农杆菌介导植物表达promoter-GFP融合双元载体
3、 载体抗性：BAR（植物中抗Basta除草剂）SPC(细菌中壮观霉素)
4、 培养条件：37度细胞培养箱
5、 其他信息：Destination载体,ccdB致死基因(未被替换的菌株致死),ATTB1,ATTB2位点
融合了GPF的载体,可以分析promoter的表达作用
6、 质粒图谱：
[img]http://images.e2002.com//images/7U558783.jpg[/img]
7、 特征序列区位：ATTB1,ATTB2位点,ccdB基因,eGFP基因
1、 质粒名称：pK7FWG2
2、 载体类型：农杆菌介导植物表达N端融合GFP(绿色荧光蛋白)双元载体
3、 载体抗性：Kan（植物中卡那霉素）SPC(细菌中壮观霉素)
4、 培养条件：37度细胞培养箱
5、 其他信息：Destination载体,ccdB致死基因(未被替换的菌株致死),ATTB1,ATTB2位点
融合了GPF的载体,可以进行基因表达亚细胞定位
6、 质粒图谱：
[img]http://images.e2002.com//images/uew59471.jpg[/img]
7、 特征序列区位：ATTB1,ATTB2位点,ccdB基因,eGFP基因,35s启动子
1、 质粒名称：pB2GW7
2、 载体类型：农杆菌介导植物表达双元载体
3、 载体抗性：BAR（植物中抗Basta除草剂）SPC(细菌中壮观霉素)
4、 培养条件：37度细胞培养箱
5、 其他信息：Destination载体,ccdB致死基因(未被替换的菌株致死),ATTB1,ATTB2位点
普通表达载体,含BAR基因
6、 质粒图谱：
[img]http://images.e2002.com//images/Gky59868.jpg[/img]
7、 特征序列区位：ATTB1,ATTB2位点,ccdB基因,35s启动子
1、 质粒名称：pK7FWGF2
2、 载体类型：农杆菌介导植物表达双融合GFP双元载体
3、 载体抗性：Kan（植物中卡那霉素）SPC(细菌中壮观霉素)
4、 培养条件：37度细胞培养箱
5、 其他信息：Destination载体,ccdB致死基因(未被替换的菌株致死),ATTB1,ATTB2位点
普通表达载体,N端C端双融合GFP,可以进行基因表达亚细胞定位
6、 质粒图谱：
[img]http://images.e2002.com//images/jz760487.jpg[/img]
7、 特征序列区位：ATTB1,ATTB2位点,ccdB基因,双eGFP基因,双35s启动子
1、 质粒名称：pK7RWG2
2、 载体类型：农杆菌介导植物表达N端融合RFP(红色荧光蛋白)双元载体
3、 载体抗性：Kan（植物中卡那霉素）SPC(细菌中壮观霉素)
4、 培养条件：37度细胞培养箱
5、 其他信息：Destination载体,ccdB致死基因(未被替换的菌株致死),ATTB1,ATTB2位点
融合了RPF的载体,可以进行基因表达亚细胞定位和蛋白互作(同CFP,YFP)
6、 质粒图谱：
[img]http://images.e2002.com//images/tv561211.jpg[/img]
7、 特征序列区位：ATTB1,ATTB2位点,ccdB基因,rfp基因,35s启动子
1、 质粒名称：pK7YWG2
2、 载体类型：农杆菌介导植物表达N端融合YFP(黄色荧光蛋白)双元载体
3、 载体抗性：Kan（植物中卡那霉素）SPC(细菌中壮观霉素)
4、 培养条件：37度细胞培养箱
5、 其他信息：Destination载体,ccdB致死基因(未被替换的菌株致死),ATTB1,ATTB2位点
融合了YPF的载体,可以进行基因表达亚细胞定位和蛋白互作(同RFP,CFP)
6、 质粒图谱：
[img]http://images.e2002.com//images/4Di61416.jpg[/img]
7、 特征序列区位：ATTB1,ATTB2位点,ccdB基因,Yfp基因,35s启动子
1、 质粒名称：pK7RWG2
2、 载体类型：农杆菌介导植物表达N端融合CFP(青色荧光蛋白)双元载体
3、 载体抗性：Kan（植物中卡那霉素）SPC(细菌中壮观霉素)
4、 培养条件：37度细胞培养箱
5、 其他信息：Destination载体,ccdB致死基因(未被替换的菌株致死),ATTB1,ATTB2位点
融合了CPF的载体,可以进行基因表达亚细胞定位和蛋白互作(同RFP,YFP)
6、 质粒图谱：
[img]http://images.e2002.com//images/elP61705.jpg[/img]
7、 特征序列区位：ATTB1,ATTB2位点,ccdB基因,cfp基因,35s启动子
发贴的过程也是我总结的过程,感觉自己进步了不少啊!
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