我在分离皂荚中的皂苷,选择展开剂的问题,求高人指点
有已上过硅胶柱的皂苷样品,欲继续分离纯化,试了多种展开剂,都分不开,求高人指点一二,不胜感激。急 ,急,急 你应该给我门一点信息啊,用什么展开剂试过,情况如何?我想你可以尝试一下低极性的乙酸乙酯和石油醚的搭配,高极性可以尝试一下氯仿和甲醇的搭配,氯仿,甲醇和水的搭配,丁醇和乙酸,水的搭配.
没有信息,只能这样瞎讲一通了,最好能帮上你!呵呵 皂苷的极性比较大 一般氯仿:甲醇 应该好使 楼上正解啊 希望更多的人参与讨论,给予帮助,谢谢。
至今为止我已经连续尝试了3个星期,板是普通的载玻片规格25mm*75mm,自己铺的,显色剂是10%香草醛浓硫酸。
主要试过的展开系统:氯仿-甲醇-水=6.5:3.5:1下层,跑出来是点样点上方长长的一条带,颜色均匀,紫色。
正丁醇-乙酸-水=4:1:5上层,跑出来是在点样点上方一小段,颜色均匀,紫色。调整了比例,4:2:5跑出来是一个清晰的紫色的点Rf=0.67
至于其它的氯仿-甲醇-水系统的比例试了很多很多了,有报道的分离三七皂苷,柴胡皂苷,海星皂苷,人参皂苷等的展开系统我都试过了,多数都是一小段,根本就没有分段的迹象。
有人提议我自己铺的板分辨率不高,以及显色剂的问题,所以我今天去买板明天接着试,请各位高人帮我分析讨论一下,到底是何原因?有何建议?期待与您交流。 如果分离的是苷元,建议的石油醚乙酸乙酯系统展开;如果分离的是带糖的皂苷一般建议用氯仿甲醇或氯仿甲醇水系统展开。极性根据需要进行适当调整(如氯仿:甲醇=9:1,氯仿:甲醇:水=8:2:0.2等)。
关于显色剂,我们现在一般用硫酸乙醇进行显色。
关于硅胶板,我们用的是青岛海洋化工厂的产品。
我建议你用这样的显色剂和硅胶板试试。
GOOD LUCK! 首先感谢楼上的给予指点,我分离的是皂苷,今天用的是20%的硫酸乙醇显色剂,然后烘烤,硅胶板用的是青岛海洋化工厂的硅胶G,主要还是试了别人说的经典的系统。氯仿-甲醇-水=13:7:2下层,有一个样炮出来2个点 其余的样都还是一个点或者一小段阿。正丁醇-乙酸-水=4:1:5上层 总皂苷(未上过柱子的)跑出来隐约可见3小段,其余上过柱子的样品,跑出来都是一小段,接近点,效果是比自己铺的板好些,可终究还是没跑开么 “正丁醇-乙酸-水=4:1:5上层 总皂苷(未上过柱子的)跑出来隐约可见3小段”“氯仿-甲醇-水=13:7:2下层,有一个样炮出来2个点”, 这样就可以分了。
实在没有其他办法了就用反相板吧,用甲醇水系统展开。 今天仔仔细细试了,氯仿-甲醇-水=13:7:2下层 是昨天配的静置过夜了的,今天用的,效果比昨天的好些,总皂苷(未上过柱子的)跑出来有4个点,但是分的不开,紧挨着的,再往上就看不出来了,其余的上过2次柱子的5个样,都跑出来2个点,位置都差不多,2个点的Rf分别是0.16 和 0.22,可是有一个样别人曾经上过高效液相,测了含量,说里面含有12种物质,我只跑出来2个点,现在能上柱了么?展开剂的梯度怎么设置呐? 实验室没有条件上反相。实在没办法了,最后再考虑,买个高效板还是我私自买的,没办法愁毕业阿。有关反相的事宜,以后再详细请教您了,7楼的朋友。 么人关注了? 我的实验无法进行了阿。现在想从浸膏开始分离,用氯仿-甲醇-水=65:35:10下层洗脱,三相的如何设置梯度阿? 大兄弟,你就不能不用板啊,你过那么难分的东西用长柱子啊,那样距离多长啊,而且肯定分的开的,到时候你分段挖就行了,在柱子上提前分开,你既然能看的出来是好几个点黏在一起那就说明是板不够长。如果展开剂都试了就试试改变其他条件。
我随便说的。 小兄弟,实验做得怎么样了? 实验一直没进展,用氯仿-甲醇-水=65:35:10下层洗脱,三相的如何设置梯度得问题还没解决,我问了别人,有人说假如用这个系统,有一个样炮出来2个点,假如就分这2个点,选择洗脱剂的比例方法是这样的,试一个比例让一个点没出来,也就是只有一个点刚冒头(在点样点出来一点点),记下这个比例,然后在调整极性,使得一个点跑上去,另一个点刚冒头,记下这个比例,难道这些比例都是一个一个试出来的么? 太难了,我不是搞植物化学成分提取的也不实搞天然产物提取的,现在摊上这事,我想死的心都有了,咋毕业阿,愁死我了 我用了一个小柱子1.2cm*20cm的上了0.1g的样,用氯仿-甲醇-水 选择了3个梯度洗脱,结果有几个瓶出来是一个点的,但是我换个展开剂,正丁醇-乙酸-水,点样,结果跑出来2个点,还是没分出来单一的物质,我目的就是得到纯品,这3个梯度是我在板上试了的,之间的极性差别已经很小了,8.5:1.5:0.15 7.5:2.5:0.1 7:2.5:0.2 可还是没分开,我现在该怎样办?我都不知道该怎样调整极性了
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