今天说说反相ODS吧
ODS填料大家应该很熟悉了，现在有很多课题组都有这种填料,它是硅胶柱分离层析的重要补充，硅胶分不开的，反相很可能分得很开，所以老板如果能发给学生ODS柱真是幸福的事情啊反相怎么用？
可以从以下几点考虑：
1，还是装柱
2，上样
3，洗脱系统
4，怎么摸条件
5，怎么检测
先分个类，下次细讲！ 我也来说说反向柱使用的一些小经验：
1，还是装柱
我们反相ODS柱都是湿法装柱。用甲醇浸泡摇匀至无气泡。跟正向硅胶柱相似。只不过这种柱子不能用砂芯。因为填料很细，会漏的。
2，上样
湿法上样：用能溶解样品的最低浓度的 甲醇/水 溶解，体积尽量少，上样。
干法上样：若样品不能溶解，则取一定量的反响填料拌样，干法上样。
3，洗脱系统
反向柱用前最好平衡竹柱子用能溶解样品的最低浓度的 甲醇/水 平衡即可。，然后甲醇的浓度依次增加。
4，怎么摸条件
呵呵，我们没有反向层析板，大致用正向板摸一下条件，套用一下即可
正相氯仿：甲醇=5：1 反相甲醇：水=6：1开始洗脱即可
3：1 4：1
5，怎么检测
与正向柱相似，点板了，看荧光，显色了。
这是本人的一点点经验，希望对大家有帮助。不正确的地方还请版主指正。也希望大家都来谈谈自己的经验技巧，建立一个交流平台。我也是初次在这发帖，请版主鼓励。 [quote]引用第1楼isolatedjoy于2007-12-13 11:33发表的 :
我也来说说反向柱使用的一些小经验：
1，还是装柱
我们反相ODS柱都是湿法装柱。用甲醇浸泡摇匀至无气泡。跟正向硅胶柱相似。只不过这种柱子不能用砂芯。因为填料很细，会漏的。
2，上样
湿法上样：用能溶解样品的最低浓度的 甲醇/水 溶解，体积尽量少，上样。
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希望大家都来讨论，财富威望轻松拿！～～～～ 我是个新手，借此问几个问题吧。请问1楼的是怎样用正相条件换反相条件？你所说的“套用正相氯仿：甲醇=5：1 反相甲醇：水=6：1开始洗脱即可”究竟是怎样得来的？还有如果样品没有紫外吸收怎样检测？
[quote]引用第3楼likefee于2007-12-18 22:26发表的 :
我是个新手，借此问几个问题吧。请问1楼的是怎样用正相条件换反相条件？你所说的“套用正相氯仿：甲醇=5：1 反相甲醇：水=6：1开始洗脱即可”究竟是怎样得来的？还有如果样品没有紫外吸收怎样检测？
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呵呵，这也只是个经验规律，并不是所有时候都实用的，植化本身就是一门经验科学，如果没有紫外就用硫酸香兰素烘板子啊 [quote]引用第3楼likefee于2007-12-18 22:26发表的 :
我是个新手，借此问几个问题吧。请问1楼的是怎样用正相条件换反相条件？你所说的“套用正相氯仿：甲醇=5：1 反相甲醇：水=6：1开始洗脱即可”究竟是怎样得来的？还有如果样品没有紫外吸收怎样检测？
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这个反向洗脱条件套用正相的，只是摸索出来的，用的长了。正相展开的条件一看，对你的样品的极性，就有了大致的把握。所以就有了
正相氯仿：甲醇=5：1 反相甲醇：水=6：1开始洗脱即可。
3：1 4：1 呵呵，最近几天真忙，几天没来，帖子都调到这儿了，顶起来！
楼上的兄弟虽然说的比较简略，不过都是精华的原创经验，再加10分！ 最近好几天没来，今天终于有空来说点东西了
从装柱说起
反相柱的优点大家都很清楚了，那么下面讲一讲怎么装柱
首先说一下，反相柱和硅胶不同，是一种很娇贵的填料，不是什么溶剂都可以用的。
首选甲醇为装柱溶剂，一般填料在久置不用的时候也是用甲醇浸泡保存的，不过有一种说法是反相液相柱需要用50%甲醇水平衡后保存，呵呵，这个就不知道为什么了，试剂代表就是这么说的。其他溶剂如氯仿，石油醚，乙酸乙酯，乙醚等绝对禁止，丙酮可以用但最好少用，用多了伤填料。乙睛可以使用。
具体过程如下：将ODS混悬于甲醇中，倒入塞了棉花的层析柱，等其沉降完毕，用纯甲醇平衡一个柱体积（对于一个200g的柱子来说，100ml足矣）,这时柱子应该压实了。可是总不能用甲醇过柱啊，所以下面应该用你准备过柱子的洗脱条件，比如30%甲醇，洗脱两个柱体积，这样平衡过以后就可以过柱了。注意换洗脱剂的时候应该小心，柱面是很容易冲坏的，操作应该轻柔。
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