讨论：“血清药理学”
[b]中药血清药理学是研究和探索中药药效作用的一种体外实验方法,对成分复杂的中药及粗提物制剂的药理实验提供了正确性、真实性和可靠性的保证,引起了医药界人士的广泛关注.由于含药血清与机体内环境相一致,从而排除了体内各种因素对中药及其制剂有效成分的影响,其科学性、可行性使中药药理研究易于深入到细胞分子水平,可对成分不明或复方中药制剂进行药效学和药动学研究.目前血清药理研究的成果及水平呈直线上升的趋势,实验报道越来越多.血清药理学实验的步骤很多,在许多重要环节上如处理不当,可使实验结果表现出假阳性或假阴性。[/b]请大家一起讨论，如何合理设计“血清药理学”的实验方法和进行实验细节的处理。 现介绍一下血清药理学
中药血清药理学的研究方法及其应用（转）
中药血清药理学是近年来逐渐发展起来的研究中药药效较为科学的一种方法，它是由日本学者田代真一于1987年首次提出的，是为了研究中药复方而诞生的一种新的体外实验方法，它是在以前体外实验的基础上加以改进形成的，即将受试药物经口给予动物后以含药血清代替中药粗提物作为药物源加入离体反应系统中研究其药理作用。它不仅具有体外实验的优点，如条件可控性强，可在细胞、亚细胞水平进行超微、生化、受体、基因等方面的研究；揭示药物作用机理较为深入，重复性好，使用材料少等，而且有其更适合中药及其复方制剂研究的独特之处。因为中药尤其是复方制剂的化学成分极其复杂，经过体外的煎煮或其他制备过程，再经口服以后在体内发生一系列变化，有的是药物本身物质发挥作用，有的是经过肝脏代谢的产物发挥作用，有的是通过第二信使间接起作用。因此，以中药粗提物的体外实验结果来评价药物的体内效应是不客观的也是不确切的。而含药血清能更好的反映药物在体内环境中产生药理效应的真实过程，在理论上更具科学性和真实性。近年来，许多专家和学者对中药血清药理学的研究进行了较为深入的研究，并取得了可喜的成绩，积累了一定经验，为中药作用机理、中药复方化学成分、中药药动学的深入研究奠定了基础。现将其研究方法和应用研究现状作一综述。
1 国内中药血清药理学方法的研究现状
1.1 在动物的选择
一般多选用大鼠、家兔、豚鼠等动物来制备含药血清，但不同种属的动物，其血清成分不同，因此在选择动物时应尽量选用与人类生物学活性近似的物种。刘成海等提出在体外培养实验中宜采用同一种单一血清，既为细胞提供营养，又为药物提供载体，还避免了多种血清的干扰，一般家兔和大鼠应为首选。
1．2 灌胃次数与时间间隔
有7～10 d法(1次／d，连用7～10 d)， 3次给药法(连续给药3次，笫1、2次间隔20 h， 第2、 3次间隔4 h)， 2次给药法(第1次给药后2 h， 再以相同剂量重复1次)等。各种给药方式都是为了达到稳态血药浓度，从而便于药物作用机理的研究。不过严格地说应该按药物半衰期给药，连续5～7个半衰期达到稳态血药浓度，但由于中药及其复方成分复杂，半衰期很难测定，所以7~10 d给药为权宜之计。如果对药物血清时效关系进行研究，则应另当别论。
1．3给药剂量
在实验中，由于含药血清加入体外反应系统后，浓度将被稀释，从而达不到在体条件下的药物浓度，反应系统可能出现假阴性反应，针对此种情况，李氏等提出按新药药理研究的技术要求设计剂量给药，将含药血清制成冷冻干燥粉(冻干粉)，以冻干粉形式加入反应系统，使之达到所需要的浓度。刘平认为给药剂量应以整体模型动物的有效剂量(即为临床成人剂量的8～18倍量)为妥。
1．4 含药血清的采集
大鼠一般给药1～2h后血药浓度达峰值，此时血清为最佳含药血清，超过一天的时间，大部分药物成分已经被代谢和排泄，药物的直接作用消失，此时的血清为机体功能状态血清。当然还要考虑例外，因此最好是通过预实验来确定最佳采血时间。
1.5 含药血清灭活与否
许多学者观点不一。有的将含药血清经56 ℃ 30 min灭活，但也有的不经灭活，直接进行体外实验。刘成海等发现正常大鼠血清无论灭活与否均可维持大鼠肝贮脂细胞的贴壁生长，两组大鼠血清对肝贮脂细胞内3H-TdR掺人的影响无明显差异，刘氏主张血清经56 ℃ 30 min灭活，可排除非药理性干扰。但徐海波等认为药物血清不宜灭活，因血清经灭活以后，血清中含有的机体在药物作用下产生的内源性有效成分将
减少或丧失，生物活性降低，会影响药理实验结果，而且与体内实验和临床用药情况也不相符。对于血清非药理性干扰可采取空白对照来衡定和排除，而细胞培养中的微生物感染，也可用微孔滤膜除菌法来防止。
2 国内中药血清药理学的应用
2.1对单核细胞产生内生致热原的研究
杨奎等应用中药血清药理字方法对含黄芩、含香薷、含羌活胜湿汤、含九味羌活丸等的血清分别对家兔单核细胞内生致热原产生过程中单核细胞内DNA、蛋白质合成速率及Ca2+内流的影响的机制进行了初步探讨。实验结果表明，中药血清药理学方法在进行中药时效关系研究方面，有着较大的优势。
2．2对肝贮脂细胞增殖及胶原合成影响的研究
刘成海、季光等分别采用中药血清药理学研究方法观察了扶正化瘀方药对培养大鼠贮脂细胞功能的影响，结果表明，扶正化瘀方药既能促进肝细胞增殖，又可显著地抑制细胞胶原生成率，在一定程度上体现了该方扶正化瘀的双重作用。
2．3对主动脉平滑肌细胞增殖影响的研究
张群豪等观察了血府逐瘀丸对实验性动脉粥样硬化家兔主动脉平滑肌细胞(SMC)增殖的影响。 结果表明血府逐瘀浓缩丸在体内外均有抑制SMC增殖的作用，血府逐瘀丸中含有抗SMC增殖的有效成分，且此成分口服有效。同时，血府逐瘀煎剂浓缩液的抑制作用比含药血清强，可能与某些有效成分未能从消化道吸收或经体内代谢失活有关。本实验为血府逐瘀丸的临床应用提供了科学依据。
2．4抗菌实验研究
杨奎等使用中药血清药理学方法进行了中药体外抗菌实验，发现含黄芩、藿香正气水或藿香正气液的血清分别具有明显的抑菌作用，抑菌率高达70％以上。该研究发现一些含中药血清具有促进细菌繁殖作用，表明一些中药可能降低机体抗御外邪的能力。同时，该研究还发现，不论是中药复方，还是单味中药，均可出现多个抑菌高峰，表明中药抗菌有效成分复杂，其吸收高峰不相一致，可以对细菌给予多次攻击，以便抑制其繁殖。因此，中药血清药理学方法有可能成为检测或反映中药不良反应的新方法。
2.5 对气管平滑肌作用的研究
黄坚等以小青龙汤煎剂为供试药物，观察了含药血清对离体豚鼠气管平滑肌的松弛作用。结果发现，口服小青龙汤煎剂的豚鼠血清具有显著抗组织胺引起的离体豚鼠气管平滑肌收缩作用，且呈良好的量效关系，与其直接煎剂进行的离体药理实验具有相似的药理效应。该实验提示小青龙汤中的抗组织胺的有效成分可通过胃肠道吸收，进入血液而发挥作用，其有效成分的达峰时间约为2 h，表明血清药效实验的可靠性及可信度在某些方面优于通常的药理实验。
2.6对免疫功能调节的研究
曾南等观察了灌服雪莲虫草精大鼠的抗凝血对NK细胞活性的影响，结果表明含药物抗凝血可明显增强NK细胞活性，1.25 g／kg剂量给药动物血清组能增强IL-2活性，但7.5 g／kg、3.75 g／kg剂量组作用不明显，相反3.75 g／kg剂量组却出现抑制作用，这可能与血清的稀释度及其内容物有关。
2．7 对中药抗瘤作用的研究
王力倩等采用中药血清药理学方法观察了含苦参、仙鹤草的血清及其煎剂对肿瘤细胞体外生长的影响，发现苦参、仙鹤草煎剂及含苦参血清均有明显的抗肿瘤活性，而含仙鹤草血清则无效。初步证明中药粗制剂有效而其含药血清无效，可能与中药粗制剂干扰因素有关，也可能与动物在体内代谢过程及血清等因素的影响有关。本实验提示中药血清药理学方法对中药抗肿瘤作用的评价有一定的意义。
2．8对附子强心作用的研究
陈长勋等采用中药血清药理学方法观察了附子对离体豚鼠左心房收缩力的影响，结果发现，与未服药动物血清相比，口服附子粗制剂后动物血清有明显增强心肌收缩力和加快心肌收缩速度的作用， 给药后2 h血清作用达高峰。证明附子煎液确含强心成分，且此成分口服有效。含附子血清与附子制剂直接给药两者对心肌的正性肌力作用基本相似，说明其强心有效成分确能经胃肠道吸收入血，且不会一经吸收立即被代谢失活。
2．9对花生四烯酸生物转化影响的研究
Massomi等研究中药黄连、赤芍、生姜、黄芩等对花生四烯酸生物转化过程影响时发现，黄连、赤芍含药血清能够抑制花生四烯酸的转化，其煎剂浓缩丸却无效。表明此过程是机体在药物作用下产生的内源性有效物质发挥的作用。综上所述，中药血清药理学方法，作为一种新的药理学方法，为中药药理研究提供了崭新的思路，为复方的深入研究提供了一条行之有效、不可替代的途径，推动了中药药理学的发展，提高了体外实验的可信性和可靠性，并使以前无法进行的研究成为可能。但它作为一种新的实验方法学，尚处于探索阶段，还存在很多问题，还不够成熟。但可以预见，随着中药化学分析手段的进步、药代动力学的不断发展、血清药理实验的深入开展，中药血清药理学所面临的问题会逐一得到解决，中药血清药理学方法会不断被完善，如能紧密配合中药化学、中药药代动力学、免疫学、分子生物学、微生物学的研究，中药走向现代化的过程将被缩短。 现在 血清药理学在很多时候的检测指标存在问题，就没人能进来讨论？ 就是想看看论坛到底有没有高手愿意来 [s:103] 3 中药血清药理学研究方法存在的问题
(1)血清学（serology)本身是一门科学，其自身组分的复杂性至今尚未完全清楚。中药复方组分亦是未知体系，两个未知
体系的简单叠加，使原本已经很复杂的体系更加复杂。由于中药有效成分药理学机制的多样性，任何一种单一元素在复方药效
作用中均可是微效的，但这种微效作用可以累加成较强的生物学效应，且由于药物组分之间的相互作用，除了少数已证明具有
受体效应的组分外，多数组分是有效成分还是无效成分尚不得而知。就目前的技术手段，人们尚不具备分析复方血清中所有的
单一成分的能力，即无法详尽的对比、分析每一单一元素在复方中的作用，限制了中药血清药理学在中药复方研究中的应用范
围。
(2)药物血清的制备中，确定药物的时效关系以及量效关系一直是中药药理研究的焦点。由于不同种类实验动物对药物敏
感程度不同；以及不同动物对药物的吸收、代谢速率不同；再则由于复方药物的组成差异，复方药物中不同组分被吸收、转化
、作用靶点和排泄的速率亦不同，目前尚未得到公认的、规范、统一的药理血清时效标准。现多采用的方法是设定多个时间点
、多个药物浓度进行观察，根据细胞培养的最大药理学效应确定最佳取血时间和药物浓度。例如：扶正化瘀方剂灌服大鼠，苦
参、仙鹤草灌服兔，取血时间均为1h为好，小青龙汤灌服豚鼠最佳取血时间为2h，兔连续3d给药后取血获得较好的实验结果［
3～5］。这样的间接评价方法是否恰当呢？作者认为；“根据实验动物消化生理学特点和复方中药组分被吸收、转化特点，确
定取血时间范围是合理和可行的”，大鼠一般1～2h可达到血药浓度的峰值，符合大鼠药物入血的生理学特点，此时的血清即
为含药血清。时间延长将有部分药物组分发生转化，此时血清应为药物代谢血清。超过1 d时间大部分药物成分已经代谢或排
泄，即药物的直接作用近乎消失。如果长时间连续给药，血清具有明显的生物学效应，此时并非仅是血清中药物成分的直接作
用，而是机体经过药理学作用后改变了生理学状态的血清（主要为因子和酶）在发挥生物学效应，该血清应该称为药物作用后
的机体状态血清。提示根据研究目的不同，我们可采用不同性质血清进行特定目的研究。
(3)辨证论治是中医诊治疾病的方法和特点，尽管实验医学中已经有人将实验与证型相结合［6］，但在实验医学中多数在
这一点上忽视中医的内涵，多采取了辨病论治的研究方法。由于辨证可以客观反映疾病的内在规律，疾病又是辨证论治的主要
依据，使二者统一起来仍然是中药血清药理学需要探讨的问题。提示选择典型证型的疾病作为研究对象是血清药理学应值得注
意的问题。
(4)中药复方并非单一成分发挥药理学作用，其实验稳定性、重现性和标准化是中医中药亟待解决的问题，也是血清药理
学面临的问题。中药复方配伍的差异、单味药物产地和炮制过程差异、复方煎制差异、使获得的实验药物血清缺少药物组分定
量的指标，影响了进一步的药效学实验的稳定性和重现性。该问题提示中药血清药理学研究的对象应该首先针对名方和验方，
选择和优化原药来源，稳定药物血清构成成分。再则需要整体实验与离体实验相结合，在整体实验被证明了药效学基础上开展
离体实验。离体实验选择的细胞应该是稳定性好、背景清晰的细胞系或克隆细胞株。 展望
尽管中药血清药理学的应用尚存许多问题，但在复方药理学研究中具有不可替代的作用。
(1)复方药物的评价采用血清药理学方法，具有直接的、快速的、敏感的准确作用，将广泛应用于复方药物的评价中。
(2)复方药物的机制研究中，血清药理学是主要研究方法之一，随着化学分析手段的完善，复方药物中有效成分逐一确认
，其药理学机制终将被揭开。
(3)随着中药血清药理学所存问题的逐渐解决，该方法将更加成熟。药物血清、药物代谢血清、药物作用后的状态血清以
及病理血清和分离成分血清将广泛应用于药理学、生理学和病理学的研究中。 全血、血浆与血清的选用原则
医学科研和临床检验的目的是为疾病的诊断、治疗、预防及预后判断提供可靠的依据。因此，保持待测体液组成与体内实际情况的一致性是必须遵循的基本原则。
从专业角度考虑，凡是涉及血细胞计数、血细胞表面抗原和受体以及血细胞内容物测定的检测，无疑应当选择抗凝全血。至于涉及血液的液体成分，究竟应当选择血浆抑或血清，主要取决于该指标的性质和检测的目的[1]。例如涉及凝血和抗凝的指标，无疑应当选择血浆；涉及免疫成分的指标，绝大多数宜选用血清。凡是可能受到凝血过程影响的指标，应当尽量选择血浆；凡是待检物既不受凝血过程影响．也不会因制备血清而改变的指标。可以使用血清或血浆。由于药物浓度在血清与血浆中并不相等[2]，故药代学与药效学观察，通常宜首选血浆[3]。但不同抗凝剂的作用机制不同。乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA)、草酸盐与柠檬酸盐是螯合Ca2+，且螯合程度为EDTA>草酸盐>柠檬酸盐。肝素通过与抗凝血酶结合而灭活丝氨酸蛋白酶(FⅡa、FXa、FⅨa、FⅪa等)。水蛭素是特异性灭活FⅡa。因此，抗凝剂的正确选择十分重要。例如副氧酶(paraoxonase，PON)-1的活性和稳定性需要Ca2+，不宜使用Ca2+螫合剂抗凝。应该选用肝素抗凝。细胞因子测定在缺乏游离Ca2+条件下较稳定，则宜选用EDTA抗凝，血小板聚集需低浓度Ca2+，则应选用柠檬酸盐抗凝 偶学中药的，看不懂，还是药理的兄弟来吧 值得大家学习以下, [s:94] 来学习下,哈哈,啥东西啊,看看, [s:94] 血清药理学发展前景不大。
首先取样时间就很难掌握，复方成分复杂，如何确定取样时间，各种组分吸收代谢速率不一，入血时间不一，作用于靶点部位和时间不一，同一时间入血的成分不一定都是起作用的成分，而“最佳采样时间”之前或之后的组分也可能是起作用的成分，而且由于代谢，原药可能有好几种代谢产物，另外天然药物同一大类物质化学结构很相似（比如人参皂苷），里面代谢产物就更复杂了。换据话说，血清药理学没有从根本上解决传统药理学研究复方的弊端，相反还比传统药理增加了不确定因素，只是刚提出来好像很有新意，所以吸引部分人参与进去。血清药理只能让研究人员更加困惑，所谓揭开中药复方之谜，血清药理根本无此能力！
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