酵母的4种质粒载体
以大肠杆菌质粒为基本骨架，具有酵母的DNA复制起始区,选择标记,有丝分裂稳定区和外源DNA插入位点
酵母质粒载体既可以在大肠杆菌复制与扩增,又可以在酵母系统中复制与扩增,故此类载体又称为穿梭载体(shuttle vector).以pBR322为基础组建的,用于酵母基因工程的质粒载体有4种:
①整合质粒(yeast integration plasmid,YIp):含有酵母的筛选标记ura3基因.但缺乏酵母的复制起始位点,所以,它只有整合到酵母染色体中才能稳定.
②附加体质粒(yeast episomal plasmid,YEp):在pBR322中插入酵母筛选标记ura3和2μ质粒DNA片段(复制起始部位和rep基因).因此,这样的质粒以附加体形式在真核细胞中复制,YEp质粒拷贝数高且较稳定.
③复制质粒(yeast replicating plasmid,YRp):含有酵母的筛选标记ura3和DNA的自主复制序列ARS(autonomous replication sequence),在真核细胞中独立自主的复制,拷贝数高但不稳定.
④稳定质粒 (yeast centromeric plasmid,YCp):在复制质粒中再插入酵母着丝粒(centromer)的一个DNA片段(CEN),此序列能保证染色体的连接物(attachment)连到有丝分裂的纺锤丝(spindle fibers)上,帮助染色体能等量地分配到子代细胞中.所以,含有CEN序列的质粒也将以同样的机制稳定地维持在细胞中,并保证了稳定质粒在子代细胞中的等量分布
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