在反相HPLC中，pK在相似化合物分离中的应用
弱碱，弱酸物质在反相柱上的保留值和pH之间的关系是可以通过质量作用定律定量描述和算出来的。质量作用定律即：BH = B+H -logH=pH
(B•H)/BH=K -logK=pK
对弱酸物质，B就是酸根，是离子(带负电)，BH是分子；对弱碱物质，B就是分子，BH是离子(带正电)。
只要我们理解了质量作用定律的平衡是动态平衡而不是静止的平衡，就能得出：RT=(TB•K+TBH•H)/(K+H)，
式中，RT 为样品保留值，TB 为B 的（理论）保留值, 当pH>pK+3时的保留值就接近TB; TBH 为BH 的（理论）保留值, 当pH<pK-3时的保留值就接近TBH.
有了TB,TBH和K 三个参数，我们就可算出任何pH下的保留值.
pK和保留值的关系在相似化合物的分离中特别有用. 以极端情况, 如果两个化合物的TB 完全一样, 20分钟; 两个化合物的TBH也 完全一样, 3分钟; 只要它们的pK 有0.5的差别, 7.5和7.0; 它们的最大DRT为4.76分(RT分别为13.88分, 9.12分), 而 流动相的最佳pH即为（7.5+7）/2=7.25.
TB,TBH和K 三个参数的测定：用不同pH流动相，测出不同保留值。如只有三对，就解三元一次方程组。如有多对，可用回归法(用矩阵运算)，较精确，也可算出相关系数R作为评估。以上运算用Excel即可, 十分方便.
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