HPLC分析氨基酸时，流动相如何选择啊？
HPLC分析氨基酸时，流动相如何选择啊？是用乙腈和水，还甲醇和水啊？各位高手请指点一二吧！ 问题也太笼统了，呵呵！建议先找文献吧，一般的氨基酸HPLC分析都有很多文献的，而且分析氨基酸时，没有规定必须用甲醇或乙腈呀。以前做过几个氨基酸，用的是氨基柱，不是一般的C18柱，流动相用的是乙腈：磷酸盐缓冲液。而且很多氨基酸分析时需要衍生化，所以还要看你是分析什么氨基酸！！
[jump] 我做的是改造氨基酸，文献中都说是做完后纯度很高，但没有提到用HPLC分析的，我是自己想检查一下它的纯度，所以才用HPLC的。我用甲醇和水做流动相，紫外检测，显示一个峰，但做质谱时却又好几个峰，所以有点不知该如何下手了，怀疑是我用的流动相不合适，没分开！看来要再试试了！另外，分析氨基酸的时候一定要用缓冲液的吗？ 流动相是要摸索的，不可以笼统的说需不需要加缓冲盐。 另外，如果你觉得会有杂质没有分离，我建议使用梯度洗脱进行分析，因为合成氨基酸时会加保护基，而加了保护基的氨基酸会比产物极性低很多，所以在你产物HPLC分析中，可能带保护基的氨基酸未被洗脱。
还有你说做质谱时却有好几个峰是什么意思？从这点上判断杂质吗？是有好几个分子离子峰出来吗？
回复 1# akalus 的帖子
用甲醇-水或乙腈-水其实没有太大区别，因为甲醇和乙腈的极性差不多，但用乙腈的话峰形较好。一般极性大的物质需要衍生后才能用反相柱，或者在流动相中加入离子对试剂，或者缓冲盐。但不同厂家生产的柱子性能不同，所以要针对具体的柱子选择合适的流动相。我做试验的一点小经验，希望对你有所帮助。了解最具有前途的完美世界私服
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质谱他们具体怎么给我做的我不太清楚，反正当时我是没让他们把分子打碎，而是仅仅看看其分子离子峰而已！多谢各位的热心帮忙，我再做一下看看具体情况吧！ 我做的多肽用乙腈，缓冲盐是用0.1%TFA用磷酸出锋位置会随配样溶剂而有所改变
回复 3# akalus 的帖子
如果在高效液相色谱上只显示一个峰，这个峰可能是一个物质，也可能是好几个物质（他们具有相同的紫外吸收只是在某个官能团存在差异），而在质谱中显示的分子离子峰或这准分子离子峰就有差异了，因为质谱可以把分子量不同的物质分开。 [quote]原帖由 [i]akalus[/i] 于 2008-4-26 14:17 发表 [url=http://forum.e2002.com/redirect.php?goto=findpost&pid=1355259&ptid=245947][img]http://forum.e2002.com/images/common/back.gif[/img][/url]我做的是改造氨基酸，文献中都说是做完后纯度很高，但没有提到用HPLC分析的，我是自己想检查一下它的纯度，所以才用HPLC的。我用甲醇和水做流动相，紫外检测，显示一个峰，但做质谱时却又好几个峰，所以有点不知该如 ... [/quote]
干嘛不做核磁做质谱呢?我觉得你的流动相没问题,做质谱出好几个峰,这个能说明什么?能说明东西不纯?纯度不高?貌似可以,但我觉得做个核磁来看比较好.而且如果你的HPLC出峰时间不是特别短,且峰形比较漂亮的话,基本能判定样品纯度高.
[[i] 本帖最后由 adobe112 于 2008-5-9 10:05 编辑 [/i]] [quote]我做的是改造氨基酸，文献中都说是做完后纯度很高，但没有提到用HPLC分析的，我是自己想检查一下它的纯度，所以才用HPLC的。我用甲醇和水做流动相，紫外检测，显示一个峰，但做质谱时却又好几个峰，所以有点不知该如何下手了，怀疑是我用的流动相不合适，没分开！看来要再试试了！另外，分析氨基酸的时候一定要用缓冲液的吗？[/quote]
我不知道你是用什么源打质谱的，EI源，ESI源，还是moditof,前两个都有可能将物质击碎的，特别是第一个，只有第3个，才是完整的一个物质一个峰！建议你问问清楚！其他的应该没有多大问题的！
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