现在各种生物公司如雨后春笋，但产品质量参次不齐，本活动调查你们实验室都在用那个公司的那些试剂盒，谈谈其使用情况和特点，推荐给大家！
比如：工具酶；修饰酶；DNA,RNA,蛋白质Maker；各种载体(真核质粒, 原核质粒, 酵母 ,病毒 )
；基因操作试剂盒（DNA操作、标记、cDNA合成、RACE等）；DNA、RNA纯化试剂盒；PCR定量以及各种PCR检测试剂盒；RNAi技术相关的制品；免疫试剂盒(ELISA酶联免疫试剂盒、免疫检测试剂盒 、免疫化学试剂盒、免疫组化试剂盒 、免疫诊断试剂盒）等等，我没法一一列举出来。
请列举一些你用过的试剂或者试剂盒，谈谈其优缺点，让大家一起分享你的实验成功之路，也为会员今后的实验设计提供便利！
规则：
1. 每个有效规范回帖最少奖励20财富，列举越多奖励将翻倍，并有1-5威望奖励！
2. 只要推荐内容不重复，可以多次回帖！回贴给予1威望奖励

请大家踊跃参加！可以就一两个用过的试剂盒谈谈，参加即有奖励哟！！

我用过一些分子生物学试剂，简单谈一谈使用的体会：
1.限制性内切酶 我们实验室用的是Roche公司的内切酶,Roche公司的酶一向口碑较好,用起来酶切效率高,很少出现星号活性的情况,但是价格较高。以前实验室用过MBI公司的内切酶，感觉和Roche公司的相比酶切效率不高，通常酶切的时间要长一点，有时候会出现星号活性，但是价格相对要低很多。
2.以前用的DNA Maker是外国货，国内公司有相关产品后使用了国内产品，感觉两者没多少差别，主要在于使用者需要标记多大的片段。建议大家支持国货
3.AT克隆的载体用过pBS-T,pUC-T,pGEM-T,pMD18-T。就克隆和蓝白筛选而言，pMD18-T的效果一直都比较好，但是该产品是日本公司的产品（Takara）。pGEM-T是Promega公司产品，价格最贵，效果很好。pBS-T,pUC-T现在都有国产的，pBS-T用的较少，pUC-T用的多一点；早期使用pUC-T时效果还可以，最近使用发现pUC-T产品筛选时，蓝斑较多，且有些白斑最后发现克隆的不是目标片段，其产品
质量好象不稳定。具体使用哪一种T-载体较好，还要看使用者在下一步操作中对酶切位点的要求。
4.做cDNA合成一直用的是Fermentas公司的产品，效果一直都不错。做3'-RACE时用的是Takara公司产品（日本），操作时没有按Takara公司产品的说明书进行，而是参照了cDNA合成的过（Fermentas公司），两种试剂盒的试剂差不多。
5.northern和sourthern杂交，做探针同位素标记时，好象国产的同位素P-32标记不上,美国货好用些。

谢谢humid兄弟交流的经验,欢迎经常来免疫与微生物区做客！

分享几种培养基：
尿素培养基
成份：蛋白胨     0．1克      氯化钠    0．5克
    磷酸二氢钾  0．2克      尿素      0．2克（或10%2毫升）
    葡萄糖    0．01克（或10%葡萄糖0．1毫升）
     H2O     100毫升      酚红（0．2%）   0．4毫升
制法：1除葡萄糖，尿素外把其它药品称好放入水中煮沸，使溶解，调PH7．2过滤，121℃高压灭菌15分钟．
    2配制尿素（灭菌）液：每100毫升基液内加2毫升．
    3配制10%葡萄糖（灭菌）每100毫升加0．1毫升．
    4分装小试管待用．
标准：
    1灭菌试验合格．
    2接种变形杆菌24小时呈红色．
用途：鉴定变形杆菌用．

胆盐中性红琼脂
成份：蛋白胨琼脂PH7．2-7．4     5000毫升
    胆  盐                2．5克
    乳糖                  5．0克
    对氨基苯甲酸            25毫克
    1%中性红溶液            25毫升
制法：
   将胆盐，对氨基苯甲酸，乳糖趁热加入已灭菌之蛋白胨琼脂中，待冷至50-60℃时，加入1%中性红液
   2．5毫升，混合后即倾注平皿，凝固待用．
*：1%中性红：1克中性红加酒精60毫升，加水40毫升

丙二酸盐培养基（缩苹果酸钠）
成份：丙二酸钠    0．3克      酵母浸膏      0．1克
    Nacl       0．2克      硫酸铵       0．2克
    K2HPO4    0．06克     KH2PO4      0．04克
    水        100毫升
    PH6．8，高压灭菌备用．
    0．2%溴麝香草酚兰乙醇  1．25毫升
制法：与枸椽酸盐利用试验相类似，是测定细菌能否利用丙二酸盐与碳源．无机铵盐为氨源而生长，生长者使培养基变成碱呈兰色．
鉴定：  克氏杆菌    （+）        赫夫尼亚    （+）
      沙门氏菌    （—）       痢疾杆菌    （—）
                          
苯丙氨酸培养基
成份：酵母浸液  1．5克       DL--苯丙氨酸    1克
                          6



    磷酸氢二钠（无水）0．5克（或L-苯丙氨酸    0．5克）
    氯化钠    2．5克          琼脂        6克
    水      500毫升          PH7．4
制法：1  将上述成份加热溶解，分装于12*125mm口径的试管中，每管约4毫升．
    2  高压灭菌121℃10分钟，趁热使试管斜置凝固后备用．
    3  接种时划斜面．
用途：鉴定变形杆菌用．苯丙氨酸脱氨酶试验变形杆菌阳性．

双抗培养基
成份：
    蛋白胨    10克        牛肉膏    5克   
    氯化钠    5克         无水亚硫酸钠  3克
    柠檬酸钠  10克         蔗糖     10克
    琼脂粉    20克         水      1000毫升
制法：
   1将上物称好，加热溶于水中．
   2调PH8．2—8．4
   3 分装高压灭菌后备用．
   倾注平板前先加热溶解琼脂等冷至50℃左右，按无菌操作加入多、庆抗菌素充分摇匀， 倾注平板，凝固后备用．
   （庆大霉素：150u/毫升，多粘菌素：1500u/毫升, 2毫升加至1000毫升培养基内，此相当于庆大霉素0.3u/毫升, 多粘菌素3u/毫升）

O2培养基
保存液：（文—腊氏液）
A液：硼酸   12．405克        KCL   14．912克
    水    1000毫升  
  取A液250毫升 0．8%NAOH   133．5毫升
    NACL     20克          水     1000毫升
    分装高压灭菌．

硝酸盐胨水
成份：
    蛋白胨    1克
    硝酸钾（无NO2）   0．1克  
    H2O      100毫升
    PH7．4，高压灭菌分装备用．
（如无硝酸钾也可用硝酸钠0．02克，NACL0．05克，H2O100毫升）
用途：硝酸盐还原试验用．
原理：测定细菌能否还原硝酸盐为亚硝酸盐，后者在酸性条件下与a—萘胺和对氨基苯磺酸发生重氮反应，
                          7



生成红色的1-萘-4偶氮苯对磺酸．
制法：试剂甲液A对氨基苯磺酸0．8克溶于5N的醋酸100毫升．
   B：乙液a-萘酚0．5克溶于5N的醋酸100毫升中
   将细菌接种于硝酸盐水中37℃培养24--96小时，加入甲液0．1毫升，再加入乙液数滴，立即呈现红或紫色为阳性

           king氏培养基（能促进绿脓菌绿色素产生）
成分：
    蛋白胨      2克             K2SO4      1克
    甘油        1克             MGCL2     0.14克
    琼脂        1.5克            H2O      100毫升
          KING氏培养基（能促进绿脓菌荧光色产生）
成分：
    蛋白胨      2克             甘油       1克
    K2SO4      0.15克            MGSO4     4.7克        H2O    0.15克
    琼脂        1.5克            H2O       100毫升
    调PH7.2     121℃20分钟消毒后使成斜面备用．

          七叶苷水解试验
原理：
    粪链球菌能分解七叶苷（Escalin）其代谢产物与铁离子结合产生黑色沉淀，使培养基变黑．
方法：
    将菌种接种在七叶苷或琼脂上37℃18小时，观察结果，培养基变黑色，其他链球菌能生长但不变黑色，肺炎链球菌不长．
成分：
    七叶苷     0.1克              胰胨        1.5克
    枸橼酸铁    0.2克              琼脂        2.0克（0.5克/50毫升）
    胆汁      2.5毫升              H2O        100毫升
    PH7.0分装小试管内高压灭菌后备用（115℃20分钟）
    七叶苷又名桑树皮甙，七叶灵，Aesclin  Escnlim  Bicolorin等．为白色针状结晶．水溶液兰色荧光．）

葡萄糖氧化发酵培养基（O/F）
成份：
   蛋白胨      2．7克            氯化钠    5．0克
   0．2%溴麝香草酚兰  0．03克        琼脂      3克
   KH2PO4     0．3克            葡萄糖      10．0克
   水         1000毫升
制法：以上成份除糖外，溶解调PH7．0，115℃高压灭菌20分钟后备用．
方法：挑取少量培养物接种两管，其中一管接种后加液体石腊不少于1厘米厚，两管同时35℃，培养过夜，
    观察颜色的变化，若无颜色变化，需继续观察七天，每日观察刺层型别．
                          8



用途：适用于微球菌科和非发酵菌的鉴定．

麦康凯培养基
成份：
      蛋白胨     20克         氯化钠       5克
      乳糖      10克         琼脂        20克
      H2O      1000毫升       1%中性红溶液   3--4毫升
      1%结晶紫   0．1毫升       PH7．4
除中性红临用时加入外，其余均高压灭菌备用．

邻硝基酚半乳糖甙（ONPG）酶试验
缓冲液：
    Na2H2PO4    6．9克   溶于40DW中，用5NNOH调PH7．0，再加水到50毫升，冰箱保存．用前若有结晶可稍加温，溶解后再用．
ONPG液：
    称取ONPG（邻硝基酚--B--D半乳糖苷）80毫克，溶于15毫升D.W中，再加上缓冲液5毫升，放入冰箱中保存．此液不稳定，如出现黄色即不能用．
鉴别：
    脑膜炎球菌和乳球菌及沙门氏菌属与枸橼酸菌属及亚利桑那氏菌属．
    脑膜炎球菌和沙门氏菌属为阴性．
    乳球菌，枸橼酸菌属和亚利桑那菌属为阳性．

半固体培养基
成份：
   牛肉膏     3克          蛋白胨     10克
   氯化钠     5克          琼脂      2．5--4克
   水       1000毫升        
   校正PH7．4，121℃高压15分钟．倾注平板，厚度约4mm，冷藏备用．

药敏培养基（M-H培养基）
成分：
   牛肉膏    5克         水解酪蛋白  0。5克
    可溶性淀粉  1。5克       琼脂      17克
   水      1000毫升    调PH7。4

氨基酸脱羧酶试验培养基
成份：
    L-氨基酸     0．5克            蛋白胨     0．5克
    牛肉膏      0．5克          葡萄糖    0．05克
    吡多醛      0．5克          水       100毫升
    2%溴甲酚紫乙醇液      0．5毫升      2%甲酚红    0．25毫升
制法：除指示剂及氨基酸外，溶解，PH6．0，然后加入氨基酸（必要时重新调PH）及指示剂，混匀分装1毫升/管加10毫米厚石蜡油，高压115℃15--20分钟灭菌备用．
注意：
    1  使用DL型AA时量加倍．
    2  最好同时接种空白管（即不含有AA的同样培养基）作对照．
                          9   



3  培养基超过24小时可出现假阳性．

葡萄糖酸盐培养基
成份：
    蛋白胨    1．5克        酵母浸液      1克
    K2HPO4   1克          葡萄糖酸钾      40克
    DW     1000毫升
溶解过滤分装，高压115℃15分钟．
结果：加班氏试剂，加热观察结果．
    黄-橙色为阳性．  无颜色变化为阴性．

阿拉伯糖（单糖）液体培养基
成份：
    蛋白胨    1克          氯化钠      0．5克
    DW      100毫升（调PH7．6）
    1．6%溴甲酚紫乙醇溶液0．1毫升
    阿拉伯糖     1克

菌种保存培养基
成份：
    琼脂     10克      DW     1000毫升
    浸10分钟加热溶解后，再加
      牛肉膏   5克     蛋白胨    10克
      氯化钠   3克    Na2HPO4.12H2O    2克
  本培养基出自上海进出口商品检验局之处方，其最大优点为：细菌保存4年后，其形态菌属特点，生化反应，血清学试验等无变化．

厌氧培养基（GAM肉汤）
成份：
    大豆胨      3克         口胨      10克
    消化血清粉  13．5克      酵母浸膏    5克
    牛肉膏     2．2克        牛肝膏（粉）  1．2克
    葡萄糖    3克          KH2PO4     2．5克
    可溶性淀粉  5克        L-半胱氨酸盐    0．3克
    硫乙醇酸钠   0．3克    肉汤（牛心汤）   1000毫升
调PH7．2--7．4，115℃高压灭菌15分．
用途：用于厌氧菌培养，是一般培养基的基础，此培养基营养最丰富，用时无需加血，可用于各类厌氧菌
    增菌用．

                          10




GMA琼脂
成份：
      蛋白胨    10克          大豆胨    3克
      口胨      10克          消化血清粉  13．5克
      酵母浸液   5克           牛肉膏    2．2克
      牛肝膏    1．2克         葡萄糖    3克
      KH2PO4   2．5克          氯化钠    3克
      可溶性淀粉  5克          L-半胱胺酸盐酸盐  0．3克
      硫乙醇酸钠  0．3克         琼脂      1．5克
      DW     1000毫升      
     调PH7．2--7．4，10分钟高压灭菌．
注意：1可溶性淀粉加热易成糊状凝块，最好先用水少许将淀粉混匀，再加沸水使成糊状，备用．
    2此培养基营养丰富，无需加促进物质．
用途：用于分离培养厌氧菌．

硫乙醇酸盐半固体琼脂
成份： L-半胱氨酸    0．25克      葡萄糖    6克
     胰蛋白胨     17克        大豆胨    3克
     硫乙醇酸钠    0．1克       氯化钠    2．5克  
     亚硫酸钠    0．1克        琼脂      0．7克
     DW       1000毫升
     调PH7．6，116℃高压15分钟．
附：V—KL添加剂：
     液体培养基0．1ug/毫升或0．1单位/毫升．固体培养基最终浓度10ug/毫升，冷却后再加VitKL．

淋球菌培养基：
   基础琼脂    3．4克       无菌抗凝羊血      10毫升
   20%葡萄糖溶液  1毫升       万古霉素       0．2毫升
   多粘菌素B    0．0375毫升   水        90毫升
用法：
    1取基础琼脂浸泡于水中，加热煮沸溶解，121℃高压灭菌20分钟．
    2加入羊血和葡萄糖，于90℃水浴中加热，不时摇动使成咖啡色．
    3冷却至60℃，加入万古霉素和多粘菌素B溶液，摇匀倒入平板，凝固备用．

醋酸铅试纸培养基（测H2S）
成份：  蛋白胨    10克       胱氨酸     0．1克
      硫酸钠    0．1克      水        1000毫升
     PH7．0-7．4 ，115℃高压灭菌20分钟．
     滤纸剪成0．5-1CM宽，用5%-10%的醋酸铅浸透，烘干，置平皿备用．

                          11



厌氧培养基
1  液体培养基  
    多价蛋白胨    2%        胰蛋白胨     1%
    酵母浸出汁    0．5%       氯化钠      0．5%
    牛肉膏      5%          半胱胺酸     0．04%
    氯化血红素    0．5%        溶剂（牛肉浸出液）溶解调PH7．4
2固体培养基： 加琼脂粉2．25%作血平板．
     
LISTER（高渗培养基）
液体用：
  蛋白胨    2%    牛肉膏     5%
  氯化钠    5%    酵母浸    0．5%
  牛心浸液作溶剂
  琼脂粉    0．8%
  调PH7．4，每瓶25-30毫升分装．
固体用：同上，加温后加右旋糖苷20毫升或60℃左右加入明胶15%．

       指示剂
  1  NaOH  溶液：  0．1N  NaOH  6毫升    DW    1000毫升
  2  0．015%美兰溶液：0．5%美兰  3毫升    DW    1000毫升
  3  6%葡萄糖溶液：  葡萄糖   6克      DW    1000毫升
以上1、2、3种溶液等量混合即成．


      指示剂
  硼酸二钠（10H2O）    2．5克        硫乙醇酸钠    2．4克
  美兰     25毫升              DW    650毫升


郭氏培养基
成份：   牛心浸液      10毫升        葡萄糖    1克
        酚红（0．4%）  1．3毫升      1%乙酸铊   2毫升
    调PH8．2-8．3  108℃20分钟．
分装时加血清或血浆（灭活）20毫升，  0．1%美兰适量．

        鞭毛染色法
玻片处理：将玻片用洗衣粉煮沸10分钟，水洗，再用清洁液浸泡，加温10分钟，水洗，再放入95%酒精脱脂，同时取出凉干，可制成涂片．
  染色液的配制：
     20%的鞣酸溶液（加温溶解）    2毫升
                          12



     钾明矾饱和液              2毫升
     石碳酸饱和液              5毫升
     10%碱性复红无水乙醇溶液      1．5毫升
  将上述各液混合后放置2-3日，过滤后备用，此液使用不得超大型过5周．
染色步骤：
   将细菌接种在琼脂平板上，培养8-18小时，（35-37℃），用无水乙醇浸泡过的而且干燥的新玻片加一滴无菌DW，用接种环挑取菌落，置DW液面上，然后自然干燥．滴加染色液染1-2分钟，水洗干后镜检．
  结果：鞭毛染成红色．


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DNA,RNAMaker 个人认为普博欣的就可以,还便宜
PCR还是TAKARA 比较保险,价格也不算太高
免疫试剂盒:中山金桥,但一抗一定要买进口的啊
ELISA酶联免疫试剂盒: 上海太阳 GBI都不错

1RT-PCR中用到的试剂盒
提组织RNA用Invitrogen 的TRIZOL LS REAGENT，效果还可以，就是要注意避免蛋白质污染。
DNAase 也可以用Invitrogen 的deoxyribonuclease I, amplification grade.
合成cDNA可用Fermentas 的RevertAid™ First Strand cDNA Synthesis Kits
PCR可用 Qiagen的 PCR 试剂盒。
我用这些试剂盒取得了较好的效果。
2 Northern 和原位杂交作过一点点，用过Roche的The DIG Northern Starter Kit ，非放射性标记，感觉RNA探针制备成功率低。不如传统的放射性标记。
3 Western blot 建议用Amersham的Hybond -P PVDF membrane 以及ECL western blotting detection reagents. 效果比较好。
4 DNA marker和 限制性内切酶用Promega的就比较好。

zymed 公司的免疫组化试剂比较值得信赖，还有serotec公司的，虽然可能会出些小问题，但售后服务还算到位。呵呵，就这点经验了，全部奉献了。

呵呵，我不是专业生物的，但我们实验室现在的主题是用化学的方法解决生物的问题。实验室常用生物试剂来源厂家为“鼎国生物技术公司”，服务态度好，送货及时，试剂齐全。如我常用的羊抗人IgG等就来源于斯。

呵呵！我也用过一段时间鼎国的产品！

我是做环境微生物的，主要涉及到
1.环境样品DNA的抽提，用的是申能博彩的3S柱
2.PCR用的是TAKARA的EX-Taq
3.基因的定量PCR用的是TAKARA的EX-Taq HS试剂盒
4.荧光原位杂交用的是上海基康的探针的试剂
以上的试剂效果从实验结果上看都不错。

个人觉得PCR用Qiagen的还可以,效果可以，价格也不算太高
免疫试剂盒:武汉博士德,但一抗要买进口的
ELISA酶联免疫试剂盒: 博士德和 GBI都还可以，售后服务比较好
其余的没有用过，不做介绍了

谢谢pekingma兄的欢迎，以后一定多来学习！
前面大家谈了些PCR试剂盒和使用情况，我也谈一点自己的体会。PCR的试剂很多，有些实验室甚至还会自己制作Taqase，使用哪种试剂盒较好还是要根据不同的需求而定。我使用过Takara和鼎国以及天为的PCR试剂盒，通常做普通的PCR时用鼎国和天为的较多，有时候扩增的片段要求保真性高时使用Takara的EX Taqase或LA Taqase。保真性要求不高时，用鼎国和天为的普通Taqase扩增效率比较高，有时候只延伸30秒，就可以扩增出约2.0kb的片段，如果用高保真的EX Taqase或LA Taqase是难以扩出这么大的片段了。高保真的酶价格都比较贵，多是进口的。
现在有些国内的生物制剂公司提出要打破国外生物制剂公司的高技术垄断，提高国内生物制剂水平，大家还是要支持国货啊！

列举几个分子生物学的试剂盒：
1、凝胶回收：
  Amersham (9602B)
   优点：快捷，效果不错。20分钟就可以完成操作。就是价格有点高（但是可以重复利用回收柱）。
  附：试剂配方：capture buffer:4.5M guanidine isothiocyanate
                                 0.5M potassium acetate (pH5.0)
                  wash buffer:10mM potassium acetate (pH5.0)
                     16.7uM EDTA (pH8.0)
                                80% ethanol  
    另国产的 TIANGEN 的回收试剂盒 (DP209) 也可以。
2、质粒提取：
  Omega
    优点：效果不错，价格也不贵 30分钟搞定。
  （其他Invirogen Pomega Roch 都不错，就是价格有点高，重复使用也可以接受）
  附：试剂配方：Resuspension Solution (or Solution I):50mM Tris-HCl (pH7.5)
                                                         10mM EDTA (pH8.0)
                                                         100ug/mL RNase A
                 Lysis Solution (or Solution II):0.2M NaOH
                                                1% SDS
                 Neutralization Solution (or Solution III):
                                            4.09M guanidine hydrochloride
                                            0.759M potassium acetate
                                            adjust final pH to 4.2 with glacial acetic acid
                 Wash Solution:60mM potassium acetate
                                 8.3mM Tris-HCl (pH7.5)
                                 0.04mM EDTA (pH8.0)
                                 60% ethanol
   望对大家有用！

工具酶　NEB,

DNAMaker 赛百盛　建议用进口的

DNA、RNA纯化试剂盒　QIGEN

RNAi技术相关的制品 AMBION

TAQ酶　TAKARA

我用的武汉博士德的 ICAM-1 免疫组化试剂盒效果很差，基本上看不出来，但他门的MCP-1免疫组化试剂盒还行，还是建议用进口的