fuxingxing

请问各位前辈
     为什么表达载体的多克隆位点两端各有一个启动子[正反向各一个]?
        这样设计有什么好处?
        
       先谢谢各位了!

love_bobo

这个具体没用过
看看其他高手的见解

cdsora

是两个相同的启动子吗？

cdsora

是sirna载体吗？sirna载体有这种情况

fuxingxing

是两个不同的启动子

分别是Ｔ７和Ｔ３（载体是pＩＥＲＳ）

另外，有些可隆载体上也有这种情况

如　　pＧＥＭ－Ｔ（启动子是T7 和sp6）

请具体介绍一下其原理和相应的优缺点


多谢了

pekingma

两个不同的启动子是启动不同的基因表达的，只要每个基因的表达元件适同向的（启动子－基因－终止子）就可以了。而至于你的两个不同的启动子在MCS处是反向的，那是因为它们所启动的两个表达元件在表达载体上是反向的，但不会影响到它启动基因的最后表达的。如果你这个表达载体上的表达元件整合到基因组中，它们也能正常表达的，因为在基因组的一条链上，有些基因表达是5----3方向转录的、有些基因是3----5方向的，但不影响到最后翻译成蛋白的！

fuxingxing

那为什么克隆载体中也有这种情况呢?

fuxingxing

补充:

是不是说表达载体上两个反向的表达元件不可能同时存在?

pekingma

引用:

引用第6楼fuxingxing于2006-09-18 21:05发表的“”:
那为什么克隆载体中也有这种情况呢?

克隆载体中有在E。coli中的复制和起始位点，只是复制质粒，一般不表达出蛋白，基因表达元件正向和方向是没关系的，正反向的位置也是相对的，

pekingma

引用:

引用第7楼fuxingxing于2006-09-18 21:12发表的“”:
补充:

是不是说表达载体上两个反向的表达元件不可能同时存在?

可能你误会我的意思了，表达载体上两个反向的表达元件是可以同时存在的呀，只要是表达元件内部的顺序是对的（启动子－基因－终止子），这是基因就能正确表达，而不管这个基因表达元件在表达载体中的位子和所谓的正向，反向。

fuxingxing

多谢斑竹

我懂了

fuxingxing

T7和T3

是不是在真核细胞表达的时候不起作用勒

还有 f 1 ori  是干什么用的?

呵呵

谢谢了