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关于一抗的疑问,请各位老师帮忙!谢谢!

本主题由 漂浮导管 于 2008-3-2 08:52 设置高亮

关于一抗的疑问,请各位老师帮忙!谢谢!

各位老师,我准备做兔的caspase-3表达。查了文献,发现他们检测兔的caspase-3表达所用的一抗为
1.免抗人,多抗 或者
2.鼠抗人活性caspase-3抗体
我也查了生物公司的说明,有兔抗兔的试剂(宿主为兔,种类特异性也可以是兔)说可以用
那我该怎样选择呢?有人说鼠抗人不能拿来检测兔;兔抗人的话拿来做人的标本可以,用在兔上可以吗?如果用兔抗兔的话,有没有什么问题,二抗应该用鼠或者羊抗兔,对吗?现在暂时还没有找到其他动物抗兔的caspase-3。
诚盼各位热心帮助!
谢谢各位!

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跟刚才一样建议你按参考文献办法做,关于兔抗兔的一抗,如果已经做了荧光标记或者标记了过氧化物酶,那么可以不用二抗直接显色。如果没有做标记,好像不能用。

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用兔抗兔的可能会出现假阳性,推荐用鼠来源的。
仅代表个人意见
FISHING

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帮你问过一个专家,他的答复
If you use rabbit anti-rabbit caspase3. It will be OK. The second, anti rabbit Ab, will only react with the rabbit primary anti caspase Ab. However, there are certain problems that could arise, so you need to give us some more details re your detection system, the tissue and the tissue prep you are wanting to use. Also, which anti Caspase 3 Ab you are using. Also....sorry, are you wanting to detect CLEAVED caspase 3 only? Or just Caspase 3?

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我要做的是兔眼视网膜高眼压下的caspase-3的表达,然后用一种药物来抑制这种表达,所以就准备做一个caspase-3的免疫组化来表现这种药物的效果.初步考虑做just Caspase 3,因为其他文献很多就是做的这个.当然也可能做CLEAVED caspase 3,因为这是caspase-3活性形式的一种表现.
谢谢kyzxzc,谢谢位战友热心解答.非常感谢exile的热心帮助!向您致敬!

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专家的答复中还想了解你用的二抗,以及显色系统,还有组织的固定方法,总之越详细越好。
另外我印象中大鼠的高眼压,缺血再灌注模型已经很成熟了,何苦用兔子呢,劳民伤财。

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exile 战友看来很了解这方面的东西,如果做兔子的话就准备做石蜡切片,DAB染色,二抗选择羊抗兔或者驴抗兔吧。
之所以选择兔而不是鼠,是因为我想做慢性高眼压模型,鼠的 慢性高眼压模型比较难做,还要笔式眼压计测眼压,而我们没有笔式眼压计。缺血再灌注模型倒可以试试。看来我要做个预试验,看那个好做,再选择兔或者鼠。
谢谢exile !

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建议不要做慢性高眼压,
眼压难以维持,重复性不好,不同动物眼压水平难以一致,结果不可信。
我看你的研究用大鼠视网膜缺血再灌注最好。
不过因为caspase-3太常见,估计人家做过了。

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暂时还没有查到高眼压或者缺血再灌注时,这种药物和caspase-3表达的关系,所以想作作.
exile,如你所说,慢性高眼压的确难稳定.我打算按你的建议对鼠的缺血再灌注模型进行一个预实验.看看好不好作.然后再选择动物.
谢谢exile这么热心为我帮忙.我想你很快就有实力把"实习版主"的前两个字去掉的

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good luck!

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我的问题和ltby的一样,检测兔心肌组织caspase-3,样本是石蜡切片,可是只找到兔抗兔caspase-3,那么二抗用什么?还是用抗兔的会不会出现假阳性呢?恳请各位战友支援!

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