Hoechst-PI双染检测细胞凋亡
Hoechst能透过胞膜完整的细胞,嵌入细胞核DNA ,使之发出明亮的蓝色荧光。
PI 仅能透过胞膜受损的细胞,嵌入核DNA ,发橘红色荧光。
紫外光激发, Hoechst-PI双染在荧光显微镜下可见4 种细胞形态:
活细胞(VN) ,染成蓝色,核呈正常结构;
早期凋亡细胞(VA) ,染成蓝色,核呈固缩状或圆珠状;
非凋亡的死亡细胞(NVN) ,染成红色,核呈正常结构;
晚期凋亡细胞(NVA) ,也被染成红色,但可见明显的染色质凝集。
HOECHST-PI 双染：
1、培养细胞中加入hoechst染液，终浓度5μg/ml；
2、37℃，避光染色10min，
3、继续加入的PI染液，终浓度15μg/ml，
4、4℃，避光反应10min，
5、荧光显微镜下观察，照相。
这是帖壁细胞的，如果是悬浮细胞可以离心收集细胞后同上操作，最后收集细胞，制成细胞涂片，荧光显微镜检测。另外这是活细胞染色，还有固定后染色的：细胞处理完毕用甲醇：冰醋酸（3：1）在4度固定5min后，PBS漂洗，进行以上操作。
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