医学论坛|医药招商|药学论坛 - 鸭绿江医药论坛 » 分子生物讨论版 » 有奖征集真核及原核表达质粒载体

159 ‹‹1 234 5 6 7 8 9 10 ››... 11

打印

[热点讨论] 有奖征集真核及原核表达质粒载体

本主题由 saturn100 于 2008-3-2 21:33 置顶

ddandgg

初级会员

Rank: 2

精华: 0
积分: 56
威望: 50 点
鸭币: 338 点
贡献值: 0 点
讨论指数: 0 点
最后登录: 2008-5-12

发短消息
加为好友
当前离线

31^# 大中小发表于 2007-10-14 12:34 只看该作者

1、质粒名称： pSilencer™ 4.1-CMV Vectors
2、载体类型： SiRNA真核表达载体
3、载体抗性：Amp（氨苄青霉素）和Neo（新霉素）
4、培养条件：37度CO2细胞培养箱
5、其他信息：穿梭载体
6、质粒图谱：

7、特征序列区位：SV40启动子和CMV启动子

TOP

ddandgg

初级会员

Rank: 2

精华: 0
积分: 56
威望: 50 点
鸭币: 338 点
贡献值: 0 点
讨论指数: 0 点
最后登录: 2008-5-12

发短消息
加为好友
当前离线

32^# 大中小发表于 2007-10-14 12:51 只看该作者

1、质粒名称： pMIR-REPORT™ miRNA Expression Reporter Vector System
2、载体类型： miRNA真核表达载体
3、载体抗性：Amp和Pur
4、培养条件：37度CO2细胞培养箱
5、其他信息：带有荧光素酶报告基因
6、质粒图谱：

7、特征序列区位：SV40启动子和CMV启动子

TOP

exile2004

版主

Rank: 7 Rank: 7 Rank: 7

精华: 0
积分: 200
威望: 149 点
鸭币: 11443 点
贡献值: 0 点
讨论指数: 6 点
最后登录: 2008-5-12

应助高手奖热心会员奖灌水天才奖

发短消息
加为好友
当前离线

33^# 大中小发表于 2007-10-15 17:16 只看该作者

人宫颈癌HPC2基因的克隆及其原核和真核表达载体的构建
HPC2属于 Polycomb group(PeG)基因家族成胞中获取了人 HPC2基因，并构建了原核和真核表，在宫颈癌组织中有大量表达…。我们的研究发达载体，为深人研究奠定了基础。，宫颈癌组织中 HPC2基因的 C端保守序列有一 1 材料和方法态性位点的改变，推测该位点的突变可能参与宫 1．1 主要试剂：Trizol试剂和 RT—PCR试剂盒为癌的发生】。为进一步研究 HPC2在宫颈癌发生 Invitrogen公司产品；限制性内切酶、T4连接酶、DNA 程中的作用，我们通过 RT—PCR方法从 Hela细连接溶液Solution I、ClAP、标准分子量 DNA Marker、及克隆载体 pT7 blue Vector均购自Takara公司；质胞、大肠杆菌 XL一10 Gold、BL一21菌株均由第四军 2．3 pCMV—Flag—HPC2真核表达载体的构建及医大学医学遗传学与发育生物学教研室提供。鉴定构建的质粒用 Hind III及 Sal I酶切鉴定，得 1．2 PCR引物设计与合成：用源于人 HPC2 mRNA 到约4．4 kb和2．0 kb的片段，与预期结果一致(图序列设计引物。上游引物：5 一CCA TGG AGC TGC 3)。 1 2 3 4 5 6 M CAG CTG TrG GCG AG一3 下游引物：5 一CCT CCG GCT ACA CCG TCA CGT ACT CC一3 ，引物合成由大连 TaKaRa公司完成。 2 000 bp 1．3 RNA 的提取及 HPC2基因的扩增：按 Gibco 1 600 1)p Trizol Reagent说明书从 HeLa细胞中提取总 RNA，反转录成 HeLa cDNA。应用 RT—PCR试剂盒扩增 HPC2基因。总反应体积为5O l，循环参数为：94℃ DI2000 DNA Marker 5 min；95℃30 s，68℃2 min，72℃1 rain，35个循环， FIG1 PCR amplification of HPC2 gene in cervical carcinoma 再于72℃延伸7 min。取5 l PCR产物行 1％琼脂图 1 宫颈癌 HPC2基因的扩增糖凝胶电泳分析。 1．4 HPC2基因序列测定：HPC2扩增产物用凝胶回收试剂盒回收；插入克隆载体 pT7 blue中，构建 pT7一blue—HPC2；转化 XLIO gold大肠杆菌，每个标本随机挑取 5个克隆，37℃振荡培养，小量提取质 000 600 粒 pT—HPC2；EcoR I及 Sal I双酶切鉴定，鉴定正 000 750 确的质粒交由上海基康公司进行 DNA序列测定。 500 250 1．5 pGEX4T1一HPC2原核表达载体的构建： pGEX4T1用 EcoR I酶切后补平，再用 Sal I酶切，回 l～4：pGEX4T1一HPC2双酶切 M，m：DNA Marker 收载体大片段；pT—HPC2用 Nco I酶切后补平，再 FiG2 Retfiction enzyme allalysis of the recombinant 用 Sal I酶切，回收 HPC2小片段。Solution I连接上 plasmid pGEX4T1一HPC2 述基因和载体片段，构建 HPC2原核表达载体，转化圈2 质粒 pGEX4T1一HPC2酶切鉴定 XL—lO感受态细胞，用含 Amp的LB平板筛选阳性 1 2 4 111 p 克隆，小量提取pGEX4T1一HPC2质粒，Nco I及 Sal I酶切鉴定。 000
1．6 pCMV2一Flag—HPC2真核表达载体的构建： 600 pCMV2一Flag用 Hind llI酶切补平后，用 Sal I再次 000 750 酶切，回收载体大片段；pT—HPC2用 Nco I酶切补 500 250 平后，用 Sal I再次酶切，回收 HPC2小片段。将大 I～4：pCMV—Flag—HPC2双酶切小片段连接，转化，获得 pCMV2一Flag—HPC2真核 M，m：DNA Marker 表达质粒；Hind III及Sal I酶切鉴定。 g,3 Retrictlon enzyme analysis of the recombinant 2 结果 plasmid pCMV——Flag，-HPC2 2．1 宫颈癌 HPC2基因的扩增、克隆及序列测定：圈3 质粒 pCMV—Flag—HPC2酶切鉴定 HPC2基因PCR产物的电泳结果可见大小为 1 674 bp的特异性条带 (图 1)。回收片段插入 pT7 blue 3 讨论克隆载体中，形成 pT7 blue—HPC2，EcoR I及 Sal I HPC2是 PcG家族成员，是果蝇 Polycomb蛋白酶切鉴定得到正确克隆。克隆测序结果与 Gene— ．在人类的同源物。PcG蛋白是一个高度保守的转录 Bank的人 HPC2基因序列相一致。抑制物家族，它不仅决定了一类发育调节基因的转 2．2 pGEX4T1一HPC2原核表达载体的构建及鉴录模式，而且参与调节细胞周期。此外，PcG蛋白异定：构建的质粒用 Nco I及 Sal I双酶切鉴定，得到常的调节也是某些肿瘤发生的关键步骤 ]，如 PcG 约5 kb和 1．8 kb的片段，与预期结果一致(图2)。蛋白家族中 bmil等成员已被证实参与肿瘤的发

【新手资源】和【医药招聘求职版】欢迎您！发好帖有奖！

[hide=1000 ][ /hide]

TOP

ddandgg

初级会员

Rank: 2

精华: 0
积分: 56
威望: 50 点
鸭币: 338 点
贡献值: 0 点
讨论指数: 0 点
最后登录: 2008-5-12

发短消息
加为好友
当前离线

34^# 大中小发表于 2007-10-15 20:19 只看该作者

1、质粒名称：psiLentGene™ Vector
2、载体类型： SiRNA真核表达载体
3、载体抗性：Amp（氨苄青霉素）和Neo（新霉素）
4、培养条件：37度CO2细胞培养箱
5、其他信息：穿梭载体
6、质粒图谱：

7、特征序列区位：SV40启动子和U6启动子

TOP

ddandgg

初级会员

Rank: 2

精华: 0
积分: 56
威望: 50 点
鸭币: 338 点
贡献值: 0 点
讨论指数: 0 点
最后登录: 2008-5-12

发短消息
加为好友
当前离线

35^# 大中小发表于 2007-10-15 20:26 只看该作者

版主，我已经按照你的要求，将其他两个图片进行了上传修改，请过目。
若有什么不足，请与我联系。

TOP

saturn100

版主

Rank: 7 Rank: 7 Rank: 7

精华: 0
积分: 270
威望: 235 点
鸭币: 14698 点
贡献值: 8 点
讨论指数: 0 点
最后登录: 2008-5-11

优秀版主奖共享天才奖热心会员奖灌水天才奖

发短消息
加为好友
当前离线

36^# 大中小发表于 2007-10-15 23:02 只看该作者

[s:64] 谢谢兄弟支持工作，不知道兄弟有什么要求，只要我能做到，尽量满足你的需求

天涯苍苍日茫茫，风色萧萧海清凉！潮涨潮落何为是，待到功成再张扬！

TOP

cai4023

新手上路

Rank: 1

精华: 0
积分: 12
威望: 8 点
鸭币: 1153 点
贡献值: 2 点
讨论指数: 0 点
最后登录: 2008-5-5

发短消息
加为好友
当前离线

37^# 大中小发表于 2007-10-16 16:00 只看该作者

连看都看不懂~~~
[s:110]

cai4023

TOP

302

准vip1

Rank: 2

精华: 0
积分: 181
威望: 172 点
鸭币: 1515 点
贡献值: 0 点
讨论指数: 0 点
最后登录: 2008-5-12

发短消息
加为好友
当前在线

38^# 大中小发表于 2007-10-23 11:39 只看该作者

1、质粒名称： pCMVTNT(TM) Vector
2、载体类型：克窿基因的体外和体内表达
3、载体抗性：Amp（氨苄青霉素）
4、培养条件：37度CO2细胞培养箱
5、其他信息：pCMVTNT载体可以方便地利用体内及体外表达系统表达克隆基因。SP6和T7聚合酶启动子与多克垄位点串联。可以用于体外转录/翻译想匹配的SPS或T7进行基因表达。由于噬菌体启动子的存在，可以在体外高效合成RNA。pCMVTNT载体还含有5`B-球蛋白先导序列，认为可以增强一些基因的体外表达。对于体内表达，该载体含有CMV增强子/启动子区域，可以在多种细胞类型中进行组成性表达。
6、质粒图谱：

7、特征序列区位：CMV启动子，多克隆位点,噬菌体f1 region

TOP

302

准vip1

Rank: 2

精华: 0
积分: 181
威望: 172 点
鸭币: 1515 点
贡献值: 0 点
讨论指数: 0 点
最后登录: 2008-5-12

发短消息
加为好友
当前在线

39^# 大中小发表于 2007-10-23 11:52 只看该作者

1、质粒名称：pTARGET™
2、载体类型：哺乳动物表达和PCR克窿载体
3、载体抗性：Amp（氨苄青霉素）和Neo（新霉素）
4、培养条件：37度细胞培养箱
5、其他信息：
简化PCR克隆：“T”突出端可直接连接热稳定Taq DNA聚合酶所扩增的PCR产物
高组成型表达：用CMV增强子/启动子，可在许多细胞类型中获得高组成型表达。在转基因小鼠中，检测28种组织，在24种组织中，可测定到CMV增强子/启动子调节氯霉素乙酰转移酶基因（CAT）的表达
蓝/白筛选：容易筛选重组克隆，单酶切释放插入DNA
稳定转化子：pTARGETTM载体带有新霉素磷酸转移酶编码区，可筛选稳定转化子
6、质粒图谱：

7、特征序列区位：SV40启动子 ,lacZ alpha ,T末端

TOP

302

准vip1

Rank: 2

精华: 0
积分: 181
威望: 172 点
鸭币: 1515 点
贡献值: 0 点
讨论指数: 0 点
最后登录: 2008-5-12

发短消息
加为好友
当前在线

40^# 大中小发表于 2007-10-23 12:03 只看该作者

phRL系列合成海肾萤光素酶报告基因载体
包括
phRL-null Vector
phRL-TK Vector
phRL-TK (Int-) Vector
phRL-SV40 Vector
phRL-CMV Vector
phRG-B Vector
phRG-TK Vector

1、质粒名称： phRL系列
2、载体类型：哺乳动物表达,报告载体
3、载体抗性：Amp（氨苄青霉素）
4、培养条件：37度CO2细胞培养箱
5、其他信息：phRL合成海肾萤光素酶 (hRluc) 报告基因载体系列包括七个载体，每个载体中插入了一个合成海肾萤光素酶序列，以利于在哺乳动物中更有效地表达海肾萤光素酶，并减少出现异常表达行为的危险。在一系列不同的启动子和载体骨架构造中，这个系列为实验者的个别实验条件提供许多机会，以选择最合适的对照载体，并且降低对照载体不必要表达和主要报告基因异常反式(trans)效果的危险性。
6、质粒图谱：
phRL-null Vector为例

7、特征序列区位：mini CMV启动子，多克隆位点,f1复制起始位点,T7,SV40,

TOP

302

准vip1

Rank: 2

精华: 0
积分: 181
威望: 172 点
鸭币: 1515 点
贡献值: 0 点
讨论指数: 0 点
最后登录: 2008-5-12

发短消息
加为好友
当前在线

41^# 大中小发表于 2007-10-23 12:17 只看该作者

1、质粒名称： pEGFP-C1
2、载体类型：哺乳动物细胞荧光蛋白表达
3、载体抗性：Kan（卡那霉素）和Neo（新霉素）
4、培养条件：37度CO2细胞培养箱
5、其他信息：带有荧光蛋白报告基因,高效表达
6、质粒图谱：

7、特征序列区位：CMV启动子，多克隆位点,f1复制起始位点,T7,SV40,

TOP

302

准vip1

Rank: 2

精华: 0
积分: 181
威望: 172 点
鸭币: 1515 点
贡献值: 0 点
讨论指数: 0 点
最后登录: 2008-5-12

发短消息
加为好友
当前在线

42^# 大中小发表于 2007-10-23 15:37 只看该作者

1、质粒名称：pGeneClipTM 系列
pGeneClip™ Basic
pGeneClip™ hMGFP
pGeneClip™ Hygromycin
pGeneClip™ Neomycin
pGeneClip™ Puromycin

2、载体类型：主要用于方便快捷地克隆人的目标序列，在人类细胞中表达短发卡RNA(shRNAs)
3、载体抗性：Amp（氨苄青霉素）
4、培养条件：37度细胞培养箱
5、其他信息：
GeneClipTM 系统提供多种带有抗性标记或hMGFP基因的真核细胞载体，可进行细胞的稳定转染。hMGFP用于测定转染效率及使用FACS治龅姆椒ㄉ秆∽鞠赴

TOP

302

准vip1

Rank: 2

精华: 0
积分: 181
威望: 172 点
鸭币: 1515 点
贡献值: 0 点
讨论指数: 0 点
最后登录: 2008-5-12

发短消息
加为好友
当前在线

43^# 大中小发表于 2007-10-23 15:45 只看该作者

1、质粒名称： psiCHECK™-1 , psiCHECK™-2
2、载体类型：起始优化RNAi
3、载体抗性：Amp（氨苄青霉素）
4、培养条件：37度细胞培养箱
5、其他信息：psiCHECKTM-1 和 psiCHECKTM-2载体为起始优化RNAi提供定量而快速的工具。这些载体可以监控与报告基因融合的靶基因的表达变化。两个载体都使用了海肾萤光素酶作为主要报告基因，所研究的基因要克隆在多克隆位点上。由针对所研究基因的合成的siRNA，或细胞内表达的shRNA所起始的RNAi过程将导致融合mRNA的切断及其降解。只要测量海肾萤光素酶活性的降低就可以方便地监控RNAi的效果。与其它融合方法相比，例如：与GFP或旗帜标签相比，海肾荧光素酶定量方法更方便快捷，灵敏度更高。psiCHECKTM 载体含有第二个报告基因，萤火虫荧光素酶，是设计来做终点裂解分析的。在psiCHECKTM-2载体中引入萤火虫荧光素酶表达归一化，获得耐用，可重复性结果。
6、质粒图谱：