引用:

引用第50楼302于2007-10-24 12:44发表的 :
下面发些invitrogen的新技术Gateway中使用的载体
Invitrogen的Gateway技术：利用λ噬菌体位点特异重组系统的BP和LR双向反应，首先将PCR产物用传统方法克隆到Gateway化的入门载体，这个目标基因就可以迅速方便而且定向地重组到任何Gateway化的表达载体上。Topo技术是利用Topo异构酶，5分钟内快速高效地将PCR产物整合到Topo化的载体上，增加Topo技术的Gateway如虎添翼，彻底简化了PCR产物进入Gateway入门载体的步骤。这项强大的体外技术大大地简化了基因克隆和亚克隆的步骤。
优点：

*无需限制酶切、无需连接，只要利用重组酶就可以穿梭于任何 Gateway化的表达载体间，典型的克隆效率高达95％以上，保证正确的方向和阅读框。
.......

呵呵不知道兄弟用过这个没有呀，我曾经想用过，不过他的感受态好像只能用DB3.1,一种很贵的细胞，所以后来就放弃了，还有就是不知道兄弟能不能给我几个载体呀，先谢谢了

两个字形容这个感受态----忽悠,我用DH5a和TOP10都没问题,他们的只是转化效率高点.

1、 质粒名称：pK7WGY2
2、 载体类型：农杆菌介导植物表达C端融合GFP(绿色荧光蛋白)双元载体
3、 载体抗性：Kan（植物中卡那霉素）SPC(细菌中壮观霉素)
4、 培养条件：37度细胞培养箱
5、 其他信息：Destination载体,ccdB致死基因(未被替换的菌株致死),ATTB1,ATTB2位点
融合了GPF的载体,可以进行基因表达亚细胞定位
6、 质粒图谱：

7、 特征序列区位：ATTB1,ATTB2位点,ccdB基因,eGFP基因,35s启动子

1、 质粒名称：pB7WG2D
2、 载体类型：农杆菌介导植物表达双元载体
3、 载体抗性：BAR（植物中抗Basta除草剂）SPC(细菌中壮观霉素)
4、 培养条件：37度细胞培养箱
5、 其他信息：Destination载体,ccdB致死基因(未被替换的菌株致死),ATTB1,ATTB2位点
普通表达载体,含BAR基因,带GFP标签
6、 质粒图谱：

7、 特征序列区位：ATTB1,ATTB2位点,ccdB基因,35s启动子,gfp标签,proID

NND,invitrigen不让咱们国家下载载体资料,严重鄙视!!!

引用:

引用第62楼302于2007-10-24 15:42发表的 :
两个字形容这个感受态----忽悠,我用DH5a和TOP10都没问题,他们的只是转化效率高点.

兄弟那个ccdB不是毒素基因吗，在DH5a中还能活吗？

引用:

引用第66楼saturn100于2007-10-24 16:47发表的 :



兄弟那个ccdB不是毒素基因吗，在DH5a中还能活吗？

sorry时间太久我记错了,以为你说的那个DB3.1是指他们提供的正常感受态,我们反应用不到这个
这是用来扩繁pDNOR载体的.

目前和Gateway齐名的还有Clontech的Infusion技术

Clontech的Infusion技术：合成引物时两端对应加入任意一种线性化载体两端15个碱基，PCR扩增目

标基因后就可以利用重组酶直接将目标基因定向重组到任意指定表达载体上的指定位点。

优点：

*开放的技术平台，任何质粒、任何目的基因都能适用。

*使得PCR产物克隆彻底摆脱了中间载体、重复亚克隆重复筛选的烦恼，一步到位，不受载体和酶切位

点的限制，不用连接、补平、磷酸化，也不受PCR产物末端影响，而且速度快（30min），重组效率高

达90%。

*在载体启动子和目的基因之间不会增加额外的碱基，真正精确定向克隆。

*Infusion试剂以冻干形式提供，可以在室温下保存和运输，不必担心运输过程中的温度问题。

缺点：不适用于一对多的克隆，目的基因无法在不同载体间穿梭。针对每个载体均要合成特定的引物

进行PCR。

这个我没用过,不过据说也很好用,这里简单介绍几个载体吧.

1、 质粒名称：pAcGFP1-C In-Fusion
2、 载体类型：哺乳动物表达载体
3、 载体抗性：Kan (卡那霉素)/neo(新霉素)
4、 培养条件：37度细胞培养箱
5、 其他信息：可在哺乳动物中表达，C端融合AcGFP1蛋白
6、 质粒图谱：

7、 特征序列区位：SV40 ，AcGFP1，MSC，HSV TK

1、 质粒名称：pAcGFP1-N In-Fusion
2、 载体类型：哺乳动物表达载体
3、 载体抗性：Kan (卡那霉素)/neo(新霉素)
4、 培养条件：37度细胞培养箱
5、 其他信息：可在哺乳动物中表达，N端融合AcGFP1蛋白
6、 质粒图谱：

7、 特征序列区位：SV40 ，AcGFP1，MSC，HSV TK

1、 质粒名称：pAcGFP1-C In-Fusion
2、 载体类型：哺乳动物表达载体
3、 载体抗性：Kan (卡那霉素)/neo(新霉素)
4、 培养条件：37度细胞培养箱
5、 其他信息：可在哺乳动物中表达，C端融合DsRed-Monomer(红色荧光蛋白)
6、 质粒图谱：

7、 特征序列区位：SV40 ，DsRed-Monomer，MSC，HSV TK

1、 质粒名称：pAcGFP1-N In-Fusion
2、 载体类型：哺乳动物表达载体
3、 载体抗性：Kan (卡那霉素)/neo(新霉素)
4、 培养条件：37度细胞培养箱
5、 其他信息：可在哺乳动物中表达，N端融合DsRed-Monomer(红色荧光蛋白)
6、 质粒图谱：

7、 特征序列区位：SV40 ，DsRed-Monomer，MSC，HSV TK

下面不是infusion系统的载体
1、 质粒名称：pSIREN-RetroQ
2、 载体类型：哺乳动物RNAi表达载体
3、 载体抗性：AMP (氨苄青霉素)/puromycin(嘌呤霉素)
4、 培养条件：37度细胞培养箱
5、 其他信息：可在哺乳动物中表达，取基因中一小段设计shRNA序列，放入载体中表达
使基因自失活。
6、 质粒图谱：

7、 特征序列区位：U6，SV40,杂交的CMV/MSV

1、 质粒名称：pBridge
2、 载体类型：酵母三杂交应用表达载体
3、 载体抗性：AMP (氨苄青霉素)
4、 培养条件：28度细胞培养箱
5、 其他信息：酵母中表达，验证蛋白互作
6、 质粒图谱：

7、 特征序列区位:MSCI,MSCII,GAL-4,TRP1,HA/NLS

引用:

引用第67楼302于2007-10-24 16:58发表的 :

sorry时间太久我记错了,以为你说的那个DB3.1是指他们提供的正常感受态,我们反应用不到这个
这是用来扩繁pDNOR载体的.

兄弟那你没有用过gateway的载体吗？
我想知道是否能有替代DB3.1的感受态