引用:

引用第75楼saturn100于2007-10-24 19:03发表的 :



兄弟那你没有用过gateway的载体吗？
我想知道是否能有替代DB3.1的感受态

用过pDNOR221和pK7GWIWG2(1),0
一般都是用试剂盒直接反应,产物用普通感受态转化就行了,
用不着DB3.1啊,不知道兄弟用它来做什么?

propagation of pDONR vectors and others, which used in the GATAWAY system, require DB3.1 competent cells is showed in the instruction of invitrogen,

so it maybe means that if you want to do the transformation with GATAWAY system plasmids , you should use the DB3.1

hope for your comments

Thank you.

可能兄弟还没明白怎么回事吧,那个ccdB基因存在的时候在普通细胞中是致死
但是反应后ccdB基因就被你的基因所代替了,所以插入新基因的载体会存活下来
而没插入的则由于ccdB基因的存在而死掉了,所以ccdB基因是个筛选机制.
ccdB只能在DB3.1这个特殊菌株中存在,是为了在这个菌株中培养Donr和destination载体的
和我们构建载体的目的没关系.

[s:94]
呵呵，我知道了，
还有一个小问题就是试剂盒里面pDONR的载体够用吗，是不是一般不用DB3.1培养呀

当然不用咱们培养，一个盒子大概用个十次左右吧，具体我忘了，不过正常的话构建个5，6个载体应该没问题。

[s:64]
好的谢谢兄弟了

[s:94] 对了，还有一个问题，不知道兄弟有没有做过用农杆菌侵染做过含有GFP的载体转化，
想知道一下这方面的技术细节

含不含GFP都无所谓,方法都是一样的,很简单,我做过多次拟南芥转化
兄弟也是搞植物的吗?

是呀，我也是做植物的，你能给我来一份农杆菌侵染拟南芥的protocol吗，最好是根的，先谢谢了 [s:64]

为什么一定要用根的?我们都是沾花的,效果也不错啊!

引用:

引用第85楼302于2007-10-25 13:17发表的 :
为什么一定要用根的?我们都是沾花的,效果也不错啊!

呵呵，因为我看得文献他们都是用拟南芥的根做的，或是洋葱表皮细胞

根的没做过不敢乱讲,我想过程差不多吧,花序侵染我已经做过多次
比较成熟，你要的话我给你方法

[s:64] 呵呵，谢谢兄弟了，可以发一份到我得邮箱吗？
youwanhui@gmail.com

谢谢了

兄弟已发给你了!是我用过的方法,不明白的地方你再问我

虽然不做这个还是支持一下！！！可能要做这方面才有！！