抗G250单克隆抗体的制备及其初步鉴定
姜耀东1,郑少斌1*,李妍2，任非3
摘要 目的 制备抗肾癌相关抗原G250的单克隆抗体并对其特异性进行初步鉴定。方法 用原核表达系统表达G250融合蛋白后，进行蛋白纯化和鉴定。以纯化后的蛋白免疫BALB/c小鼠，通过杂交瘤技术制备单克隆抗体。亚类鉴定用阳性杂交瘤细胞培养上清液检测,按HyCult 公司的鼠单克隆抗体亚类检测试剂盒说明书进行操作。抗体效价的测定采用间接ELISA法，每株单克隆抗体的细胞培养上清按2倍比稀释，腹水按200倍比稀释。抗体特异性的鉴定采用ELISA法、免疫印迹（Western blot）和免疫组织化学法进行。结果 共获得7株抗G250的单克隆抗体，1株单克隆抗体的亚类为IgM，1株为IgG2a，其余均为IgG1， 腹水效价为1：8000～1：64000，抗体的特异性好，免疫组化结果显示人透明细胞癌有阳性信号，而正常肾组织为阴性。结论 获得特异性针对G250的单克隆抗体，为肾癌的诊断和疫苗研究提供了条件。
前列腺癌组织中10号染色体变异及LOH与骨转移的关系
侯铸 罗勇 姜永光 李明川 林云华
首都医科大学附属北京安贞医院泌尿外科 北京 100029
目的：原发性前列腺癌是老年男性常见的恶性肿瘤，在欧美国家居男性恶性肿瘤首位，特异性骨转移是前列腺癌患者常见的致死原因。前列腺癌的发生和进展是一个多因素作用、多基因参与的级联反应过程。其中，染色体变异是其发生、发展中不容忽视的重要因素。为了探讨前列腺癌生物学特性变化的细胞遗传学基础，本研究对18例原发性前列腺癌患者的外周血细胞进行染色体核型进行了比较分析，并在此基础上鉴定了相关染色体的杂合性缺失（loss of heterozygosis, LOH）位点，为研究前列腺癌特异骨性转移的相关基因奠定基础。探讨人前列腺癌特异性骨转移的细胞遗传学机制。
方法：对18例前列腺癌患者进行染色体核型初步分析，确定与骨转移密切相关的可能变异染色体。再应用PCR及微卫星多态性技术对10号染色体上的7个微卫星位点LOH进行了检测。
结果：12例伴有远处转移的患者组织样本中，染色体变异率依次为10号染色体占91.7%（11/12 )，Y染色体占25.0%（3/12），21号染色体、12号染色体及15号染色体均占8.3%（1/12）。11例原发性前列腺癌样本在D10S1693~D10S587（10q24.3-q25.3）区有LOH，是一个高频的LOH区。
结论：本研究发现了前列腺癌10号染色体上一个新的高频LOH区，位于D10S1693和D10S587微卫星位点之间，即10q24.2-q25.3区，与前列腺癌远处转移密切相关。已知肿瘤抑制基因MXI1位于10q24-q25区， MXI1 基因可编码一种Myc结合蛋白，负调控原癌基因C-Myc，而C-Myc则参与正常细胞增生、转化和分化的调控，我们推测它可能是此区重要的候选肿瘤抑制基因。其是否参与了前列腺癌的发生和发展，或者在这个区域中是否还存在其他可能相关的癌基因、抑癌基因，还有待于进一步研究和证实。
The Use of Three-dimensional Ultrasound Micro-imaging to Monitor Prostate Tumor Development in a Transgenic Prostate Cancer Mouse Model
Guojun Wu 1, He Wang1, Lei Yu1, Liguo Wang1, Jim Wu Xuan2
1Department of Urology, Xi-jing Hospital, the Fourth Military Medical University, Xi’an, China, 710032; and 2Department of Surgery, University of Western Ontario, London, Ontario, Canada, N6A 4G5
Objective: Longitudinal studies of mouse cancer models required large cohorts since autopsy was the only reliable method to evaluate treatment efficacy. This paper reports the use of high-resolution three-dimensional ultrasound micro-imaging to monitor prostate tumor development in genetically engineered mice.
Methods and Results: Twenty-nine genetically engineered prostate cancer mice, including castrated and uncastrated mice, were imaged by three-dimensional ultrasound. A total of 15 tumors were identified by ultrasound imaging and confirmed by gross pathology and histopathology in 12 different mice between the ages of 4 and 8 months, including ten ventral prostate (VP) tumors, three dorsolateral prostate (DLP) tumors, and two anterior prostate (AP) tumors. One of mice with VP tumor was castrated right after the tumor was detected by ultrasound. Seventeen mice without macroscopic tumors that were either sacrificed or died while under anesthetic were also included in the detection study. Four tumors, including the castrated one, yielded sufficient images for longitudinal analysis, meaning images were acquired on at least three different days where the maximum diameter of the tumor fit within the 1212 mm2 two-dimensional field of view of the ultrasound system. Once a lesion was detected, that mouse was imaged every two to three days to monitor tumor growth. Mice were euthanized when the tumor burden shown by ultrasound became large or the animal’s health deteriorated. Animals were imaged and euthanized on the same day to enable comparisons of ultrasound and pathology observations. Comparing with the three uncastrated tumor growth curve which tumor grows from 5.33 to 10.53 mm within 19 days, from 3.50 to 7.10 mm within 12 days and from 7.00 to 13.90 mm within 16 days, the tumor of the castrated mouse shrinked at the beginning and then developed slowlier from 4.37 to 11.81 mm in 50 days. The correlation coefficients for the four growth curves, r = 0.988, 0.985, 0.975 and 0.993, indicate that an exponential function realistically models diameter growth during the period of rapid tumor progression in this model. Diameter doubling times estimated from the exponential curve fits were 10.3, 16.8, 20.6 days for three uncastrated tumors and 37.4 days for the castrated tumor. Three-dimensional ultrasound images were compared with serial histology sections to demonstrate the fidelity and applicability of the ultrasound images of PSP94-TGMAP tumors. One mouse which was sacrificed at age five months and had a ventral prostate tumor with a maximum diameter of 7.3 mm was selected for these comparisons. Tumors were dissected and processed using standard histological slide preparation and hematoxylin and eosin staining techniques. Seventy serial histology slides were obtained from the isolated ventral prostate tumor. Paired sagittal diameter measurements obtained from three-dimensional ultrasound images and gross pathology specimens of eleven tumors in the mice that were diagnosed tumor positive by the ultrasound operators are plotted. The plot shows a straight-line fit to the data obtained by linear regression. The Pearson’s correlation coefficient was r = 0.997 and indicated significant (p < 0.001) correlation between the ultrasound and gross pathology diameter measurements. Prospective diagnoses were made by the ultrasound operators for 29 mice, including twelve with prostate tumors and seventeen without tumors subsequently confirmed by pathology. The ultrasound operators’ tumor detection sensitivity and specificity were 91.7 and 100%, respectively.
Conclusions: Three-dimensional ultrasound will likely become the micro-imaging modality most readily adopted for mouse pre-clinical trial studies.
EPO抗凋亡和促血管生长作用在前列腺癌研究中的意义
黄金明 孙颖浩
第二军医大学附属长海医院泌尿外科
目的： 探讨促红细胞生成素(erythropoietin EPO)在前列腺癌细胞系中抗凋亡及促进肿瘤中血管新生的机制，为进一步研究Epo在前列腺癌的发生发展中的作用打下基础，并为将来基因治疗前列腺肿瘤做好准备。
方法： 促红细胞生成素(erythropoietin EPO)在传统观点中被认为仅作用于骨髓造血细胞，近年发现EPO除在肾脏组织表达外，同时在肿瘤组织、神经组织、女性生殖系统恶性肿瘤有较强的表达，其作用还参与了抗凋亡、抗缺氧、促进新生血管生成等，如果EPO促进前列腺癌细胞恶性化生长，则EPO治疗前列腺癌全雄激素阻断后的贫血将慎重考虑。
结果：EPO在LNCaP及AI LNCaP细胞系中应用EPO在Bcl2,Akt,P53，VEGF, FGF等mRNA表达与对照组比较有差异性，LNCaP荷瘤鼠应用了EPO比对照组肿瘤生长快，同时通过彩色多普勒和能量多普勒声学检测试验组血管密度高。
结论：EPO能够抑制前列腺癌中细胞凋亡，同时促进肿瘤中血管新生。
Notch1和配体jagged1在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义▲国家自然科学基金资助课题(项目批准号：30571858)
艾星 史涛坪 傅斌 郎斌 张军 许凯 王保军 居正华 马鑫 李宏召 郑涛 张旭*
武汉同济医院泌尿外科
目的：Notch1受体蛋白及其配体Jagged1蛋白的异常表达常见于多种原发性肿瘤，但它们与膀胱移行细胞癌的关系仍不清楚。本研究拟探讨膀胱移行细胞癌组织中Notch1受体蛋白及其配体Jagged1蛋白的表达，以及它们与膀胱移行细胞癌分化程度的关系。
方法：采用免疫组织化学SP法检测52例膀胱移行细胞癌和10例正常膀胱粘膜石蜡标本中Notch1和Jagged1蛋白的表达，结合临床资料进行分析。
结果：正常膀胱粘膜石蜡标本中Notch1和Jagged1蛋白表达率分别为100％（10/10）、90％（9/10）；膀胱移行细胞癌组织中Notch1和Jagged1的阳性表达率分别为77.2％（41/53）和89.1％（47/53）；两者在初发和复发的膀胱移行细胞癌中的表达有显著差异，随着膀胱移行细胞癌的复发表达明显减弱P=0.000；Notch1和 Jagged1的表达率在膀胱移行细胞癌Ⅰ级、Ⅱ级和Ⅲ级之间两两比较，表达均有明显差异(P<0.05)，Notch1的表达水平与Jagged1的表达水平正相关F=0.002。
结论：Notch1和 Jagged1的表达与膀胱癌的分化程度密切相关，可能是判断膀胱移行癌生物学行为的重要指标。
siRNA介导survivin基因沉默诱导人前列腺癌PC3、LNCaP细胞凋亡的研究
刘建光 杨进益 魏伟
大连市友谊医院泌尿外科
目的：研究siRNA对survivin表达和前列腺癌PC3、LNCaP细胞凋亡的影响
方法：应用siRNA设计软件，设计针对survivin基因的3个siRNA序列，体外转录合成；PC3、LNCaP细胞培养，通过脂质体将siRNA转入PC3、LNCaP细胞；MTT法检测细胞增殖的抑制率（IR）；TUNEL法检测细胞的凋亡指数（AI）；半定量RT-PCR检测survivin mRNA表达水平； Western Blotting检测survivin 蛋白表达强度。数据用x±s表示，以SPSS11.5统计软件包统计分析,组间比较采用单因素方差分析和N-K检验。
结果：转染后siRNA 3组的PC3细胞增殖的抑制率（IR）：43.84% 58.21% 54.31%；凋亡指数（AI）：22.3% 37.93% 30.34%；显著高于正常对照组PC3细胞增殖的抑制率（IR）：2.40% 和凋亡指数（AI）：3.81%；LNCaP细胞增殖的抑制率（IR）：41.78% 56.11% 53.31%；凋亡指数（AI）：18.33% 34.53% 28.44%；显著高于正常对照组LNCaP细胞增殖的抑制率（IR）：1.97% 和凋亡指数（AI）：3.43%。
结论：survivin是重要的细胞凋亡因子，可以作为肿瘤基因治疗的靶点，为siRNA介导的前列腺癌基因沉默治疗提供实验依据。
三氧化二砷免疫蛋白微球治疗膀胱肿瘤的研究
周洁,郭晓云,莫曾南,曾甫清
广西医科大学第一附属医院
目的：研究单抗BDI-1导向的三氧化二砷免疫蛋白微球（As2O3-（HAS-NS）-BDI-1）对膀胱肿瘤的特异性杀伤作用。
方法：通过粘膜下注射的方法建立裸鼠膀胱肿瘤的原位模型，经尿道置套管针膀胱灌注给药。种植肿瘤的小鼠分为A、B、C、D4组，每组7只， A组与B组小鼠灌注As2O3-(HAS-NS)-BDI-1悬液，砷剂量分别为0.6mg/Kg和0.3mg/Kg。 C组小鼠灌注As2O3 PBS溶液，砷浓度为0.3mg/Kg，D组为阴性对照组，灌注PBS液。观察小鼠生存情况并记录生存时间。解剖显微镜下观察肿瘤生长和浸润情况。膀胱肿瘤和各器官石蜡切片染色观察膀胱肿瘤生长和浸润情况及各器官毒性表现。原位末端转移酶标记（TURNEL）方法检测肿瘤细胞凋亡,据染色程度及染色细胞百分率进行评分.计分析采用t检验及Ridit分析
结果：D组种植一周后小鼠状态逐渐较差，活动减少，毛色晦暗，体重减轻，下腹部可触及明显肿块。C组肿块生长明显较D组慢，但生活情况较D组无明显改善，且多数小鼠出现了腹泻，体重下降更加明显。小鼠平均生存时间并不长于D组（P>0.05）。A组和B组小鼠给药后小鼠一般状况较好，活动较多，毛光泽，下腹部肿块缩小或没有出现。显微镜及石蜡切片观察到A组和B组肿瘤生长及向周围浸润受到明显抑制（95.2%），肿瘤多数未浸润至肌层以外，肿瘤细胞分裂及增生明显好于D组，间质较多，病理核分裂相细胞较少,各器官毒性表现明显较C组轻. 两两比较可见各组肿瘤细胞凋亡率有明显差异（P<0.05），灌注As2O3-(HAS-NS)-BDI-1组凋亡率明显较高。
结论：As2O3-（HAS-NS）-BDI-1膀胱灌注抑制原位膀胱肿瘤生长且不引起明显的全身毒性反应,其作用机制与As2O3特异性的作用到肿瘤局部而促进肿瘤细胞凋亡有关。
Bcl-2和Bax在前列腺癌不同周期时相的表达
1李学松 3孙国锋 1周利群 1何志嵩 1辛殿琪 1那彦群 2梁云燕 2王代树 1郭应禄
作者单位：1.北京大学第一医院泌尿外科，北京大学泌尿外科研究所，100034
2．北京大学肿瘤医院 北京肿瘤防治研究所100034
3．北京大学首钢医院泌尿外科
联系电话：13371780908
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【摘要】 目的 探讨凋亡相关基因Bcl-2和Bax在前列腺癌不同周期时相的差异表达及意义。方法 应用改良的胸腺嘧啶核苷（thymine deoxyriboside,TdR）和高压笑气双阻断法把前列腺癌细胞系PC-3同步在不同的周期时相，应用流式细胞术检测同步化的效率。进而应用RT-PCR及Western blotting方法检测不同周期时相Bcl-2和Bax在mRNA和蛋白水平的表达。结果 前列腺癌细胞系PC-3的M、G1、S和G2期细胞同步化效率分别为92.1%、87.0%、80.2%和75.9%；Bcl-2在不同周期时相均有表达且存在差异，G1 期表达水平最高，S、M和G2期表达水平显著降低，mRNA和蛋白水平表达具有一致性；Bax在mRNA水平G1 期G2期表达水平最高，S和M期表达水平较低，各周期Bax蛋白水平表达没有明显差别。结论 细胞周期对凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达有显著影响，对于采用Bcl-2/Bax途径治疗前列腺癌具有指导意义。
【关键词】：前列腺肿瘤； 细胞周期； 凋亡； Bcl-2
转染NK4基因膀胱癌移行上皮细胞下调HGF表达摘要
潘卫兵 张青汉 余毅恺 叶绪龙 董能本 彭伟
湖北省黄石市中心医院泌尿外科
目的： 研究转染NK4基因对膀胱癌上皮细胞HGF基因表达的影响，为进一步对膀胱癌的基因治疗提供理论基础。
方法：2.1细胞培养和转染人膀胱癌移行上皮细胞BIU-87培养传代后，将质粒pcDNA3（+）、pcDNA3 /NK4和生理盐水各1.5ug加入无血清的6孔板培养基中，混匀后放入培养箱。 2.2 转染细胞的筛选在培养箱6个小时后，将6孔板中培养基更换为含G418 400ug/ml的选择培养基，同时用未加转染细胞做对照。5天后当对照细胞大部分死亡后，更换含G418 200ug/ml的选择培养基维持筛选10天后，抗性克隆形成，应用有限稀释法获取G418抗性细胞单克隆。 2.3RT-PCR检测NK4mRNA在阳性转染单克隆细胞转录水平的表达转染后的细胞和未转染的细胞各取5×105，TRIZOL法一步提取总RNA，逆转录合成cDNA，以cDNA为模板，扩增NK4全长，参照NK4基因序列设计上下游引物分别：p1:ATCAGGCAAGATTTGTCAGCG; P2:GAGCAGTAGCCAACTCGGAT。内参：β-actin，产物大小672bp。PCR产物经2%琼脂糖电泳，用紫外分光光度计观察电泳条带，检测其含量和纯度。 2.4 Western bolt检测细胞分泌NK4蛋白的表达 NK4转染组、空载体转染对照组两组细胞各共孵育5天，分别收集2×107个对数生长期的NK4转染细胞和空载体转染细胞的培养上清液。聚丙烯酰胺凝胶电泳，转移至硝酸纤维素膜上，兔抗人NK4抗体结合，二抗孵育，加底物后曝光，进一步筛选出表达强的克隆。 2.5Western bolt检测HGF的表达选取表达强的克隆，三去污法提取转染细胞总蛋白，经SDS-PAGE电泳后，转至硝酸纤维膜，检测一抗为鼠抗人HGF，二抗为HRP-羊抗鼠IgG，以DAB为底物显色剂将转染细胞提取的总蛋白经SDS-PAGE电泳后，转至硝酸纤维膜，检测一抗为鼠抗人HGF（以标准HGF为阳性对照）。二抗为HRP-羊抗鼠IgG，以ECL为底物显色剂。
结果： 转染阳性细胞NK4 mRNA恒定表达，RT-PCR和Western-blot分别显示在mRNA转录水平和蛋白表达水平，稳定转染的膀胱癌细胞NK4含量明显高于对照组。转染了NK4基因的肿瘤细胞HGF蛋白表达水平明显降低，而转染空载体则没有作用。
结论： 脂质体将外源NK4基因导入肿瘤细胞后能稳定表达NK4蛋白，而且可以有效降低肿瘤细胞HGF表达的水平。
Syndecan-1和乙酰肝素酶在肾癌中的表达和临床意义
涂响安 丘少鹏 邓春华 吕自力 戴宇平 陈凌武 陈 炜 郑克立
中山大学附属第一医院黄埔院区泌尿外科 （广州510070）
目的：探讨人肾癌中Syndecan-1和乙酰肝素酶蛋白的表达水平及其与肾癌发生、发展和转移的关系。
方法：应用免疫组化Envision二步法研究62例肾癌中Syndecan-1和乙酰肝素酶蛋白的表达水平。
结果：Syndecan-1在肾癌中的阳性表达31例 (50%) ；G1、G2和G3 期肿瘤中其阳性表达分别为1例(5.6%)、16例(53.3%)和14例(100%); T1、T2 和T3期肿瘤中其阳性表达分别为4例(15.4%)、13例(65%)和14例(87.5%); 淋巴结转移阳性和阴性者肿瘤中其阳性表达分别为21例(91.3%)和10例(25.6%);其表达率与肿瘤的病理分级、临床分期和淋巴结转移有相关性((P<0.01) 。乙酰肝素酶蛋白在肾癌阳性表达率为24.2% (15/62)； G1、G2和G3 期肿瘤中其阳性表达分别为1例(5.6%)、3例(10%)和11例(78.6%); T1、T2 和T3期肿瘤中其阳性表达分别为1例(3.8%)、2例(10%)和12例(62.5%); 淋巴结转移阳性和阴性者肿瘤中其阳性表达分别为14例(60.9%)和1例(2.6%);乙酰肝素酶蛋白阳性表达率与肿瘤的病理分级、临床分期和淋巴结转移有相关性( P<0.01)。Syndecan-1和乙酰肝素酶蛋白共同阳性表达12例(31.0%)，呈正相关（γ=0.321， P<0.01），Syndecan-1和乙酰肝素酶蛋白共同阳性表达率与肿瘤的病理分级、临床分期和淋巴结转移有相关性( P<0.01) 。
结论：Syndecan-1和乙酰肝素酶蛋白的共同表达能成为肾癌发生和发展的预后参数。
Bcl-2基因在人膀胱癌细胞中表达对CTL凋亡诱导作用的影响
时京 孔垂泽 刘贤奎 刘奔 孙志熙
中国医科大学附属第一医院泌尿外科
目的：探讨Bcl-2基因在人膀胱癌细胞中表达对细胞毒性的T淋巴细胞（CTL）凋亡诱导作用的影响。
方法：采用基因重组技术构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/Bcl-2；应用脂质体介导的基因转染技术将pcDNA3.1(+)/Bcl-2导入膀胱癌BIU-87细胞，RT-PCR检测Bcl-2基因表达水平；不同浓度抗Fas单克隆抗体（Anti-Fas mab）模拟CTL的Fas-配体（Fas-L）处理转染与未转染Bcl-2基因的膀胱癌细胞，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法，吖啶橙(AO)荧光染色法和流式细胞检仪（FCM）分析细胞存活和凋亡情况。
结果：酶切和核酸测序证明真核表达载体pcDNA3.1(+)/Bcl-2构建成功。将重组质粒转染膀胱癌细胞后，RT-PCR分析表明，转染Bcl-2基因的BIU-87/Bcl-2细胞的Bcl-2基因表达水平较BIU-87细胞和转染空载体的BIU-87/neo细胞显著提高（P<0.01）。Anti-Fas mab 作用后，BIU87/Bcl-2细胞的存活率显著高于BIU-87和BIU-87/neo细胞（P<0.05或P <0.01）。三种细胞虽均发生凋亡的形态学改变，但BIU87和BIU87/neo细胞改变更为明显，两者的凋亡率分别为(25.33±3.00)%和(27.05±1.75)%，而BIU-87/Bcl-2细胞的凋亡率为(18.06±1.41)%，显著低于前两者（P<0.01）。
结论：Bcl-2基因高表达通过阻断CTL杀伤膀胱癌细胞的Fas/Fas-L途径，使膀胱癌细胞能够抵御免疫系统中CTL的攻击。
HIF干扰表达载体psilencer3.0-HIF-αsiRNA的构建和鉴定
徐可 丁强 于江 方祖军 郑捷 张元芳
复旦大学附属华山医院泌尿外科
目的：构建psilencer3.0-HIF-αsiRNA重组质粒，为探讨HIF-1和HIF-2的功能奠定基础。
方法：设计并化学合成可以抑制HIF-1α和HIF-2α的siRNA，通过细胞转染的方法将其构建进RNAi表达载体。采用实时定量PCR和Western blot检测构建成功的RNAi表达载体在mRNA及蛋白水平对目标基因表达的抑制。
结果：转染4种重组质粒的细胞HIF-1αmRNA相对表达量均小于1, 其中psilencer3.0-HIF-1αsiRNA2和psilencer3.0-HIF-1αsiRNA3的干扰效应尤为明显, 在转染48h后的786-0细胞中, 抑制率分别达到了75.4%、82.1%；在OS-RC-2细胞中，抑制率则达到了82.3%和91.2% 。转染4种重组质粒的细胞HIF-2α mRNA相对表达量均小于1,其中psilencer3.0-HIF-2αsiRNA1和psilencer3.0-HIF-2αsiRNA3的干扰效应尤为明显, 在转染48h后的786-0细胞中, 抑制率分别达到了76.1%，87.4%；在OS-RC-2细胞中，抑制率则达到了72.3%和81.2%。在转染的786-0细胞中转染4种HIF-1α干扰质粒的实验组蛋白表达量较空白对照均有不同程度的减低,其中psilencer3.0-HIF-1αsiRNA2和psilencer3.0-HIF-1αsiRNA3组的蛋白表达水平相对最低；在OS-RC-2细胞中, 转染psilencer3.0-HIF-1αsiRNA2和psilencer3.0-HIF-1αsiRNA3组的HIF-1α蛋白降低水平更加明显。在转染的786-0细胞中转染4种HIF-2α干扰质粒的实验组蛋白表达量较空白对照均有不同程度的减低,其中psilencer3.0-HIF-2αsiRNA1和psilencer3.0-HIF-2αsiRNA3组的蛋白表达水平相对最低； 在OS-RC-2细胞中, 转染psilencer3.0-HIF-2αsiRNA1和psilencer3.0-HIF-2αsiRNA3组的HIF-1α蛋白降低水平更加明显。
结论：构建成功的RNAi表达载体可以有效抑制目标基因HIF-1和HIF-2在mRNA及蛋白水平的表达。
重组人钠碘转运体基因的腺病毒在前列腺癌细胞系表达
丁晔磊 高小峰 许传亮 王林辉 孙颖浩
第二军医大学附属长海医院泌尿外科
目的：临床上对转移性前列腺癌尚无有效的治疗方法，而通过基因重组技术可使前列腺癌细胞表达功能性的钠碘转运体，进而对放射性碘治疗敏感，癌细胞内放射性碘浓聚以达到杀伤癌细胞的目的。本研究通过观察重组人钠碘转运体（human sodium iodide symporter, hNIS）基因的腺病毒体外转染前列腺癌细胞LNCaP，证实LNCaP经hNIS基因治疗后能表达有摄碘功能的NIS，从而对放射性碘治疗敏感。
方法：我们在前期研究中已成功构建了两种复制缺陷型而带有不同启动子所调控的hNIS基因的重组腺病毒：Ad.CMV-hNIS和Ad.PSMA-hNIS。组织非特异性的CMV启动子可使目的基因在所有细胞系中表达，而具有前列腺组织高度特异性的PSMA启动子则使hNIS只在LNCaP中表达。体外转染前测定腺病毒对LNCaP最佳感染倍数（multiple of infection, MOI）。将两种重组腺病毒及对照腺病毒以所测定的最佳MOI体外转染LNCaP 3小时。在转染后第2、4、6天做125I摄碘实验，观察LNCaP摄碘活性达到峰值的时间点。同时运用免疫细胞化学和免疫蛋白印迹方法，检测两种重组腺病毒转染的LNCaP细胞膜上NIS蛋白的存在。
结果： 腺病毒对LNCaP最佳MOI为30。LNCaP摄碘活性在重组腺病毒转染后第4天达到峰值，Ad.PSMA-hNIS、Ad.CMV-hNIS及对照腺病毒转染的LNCaP摄碘量分别为12961±341cpm，8255±243cpm，414±48cpm。免疫细胞化学和免疫蛋白印迹检查证实两种重组腺病毒转染的LNCaP细胞膜上有NIS蛋白的存在，其中Ad.PSMA-hNIS转染的LNCaP细胞膜上的NIS表达水平高于Ad.CMV-hNIS转染的LNCaP。
结论：Ad.PSMA-hNIS可使前列腺癌细胞膜上特异地表达更多的功能性NIS，125I治疗可使前列腺癌细胞内碘聚集，为前列腺癌基因治疗提供新的策略。
