返回列表 回复 发帖
fenghao2006

丑小鸭

Rank: 1

帖子
32 
精华
0 
积分
0 
威望
1 点 
鸭币
251 点 
贡献值
0 点 
讨论指数
0 点 
在线时间
19 小时 
注册时间
2007-12-29 
最后登录
2008-3-18 
1#
打印
tT
发表于 2008-1-5 14:56 | 只看该作者

northern bolting

bolting, northern, 克隆, 分子, 电泳
大家有没有跑过变性琼脂糖凝胶电泳啊?我按照分子克隆上的步骤做的,但是跑了好几次都跑不出任何东西?
你们知道是什么原因吗?
本主题由 saturn100 于 2008-3-2 21:48 设置高亮
收藏 分享 评分
做人要知足，做事要知不足，做学问要不知足!
回复 引用

订阅 TOP

saturn100

版主

Rank: 7Rank: 7Rank: 7

帖子
1431 
精华
0 
积分
97 
威望
287 点 
鸭币
14864 点 
贡献值
8 点 
讨论指数
0 点 
在线时间
1115 小时 
注册时间
2007-5-21 
最后登录
2009-1-5 
2#
发表于 2008-1-5 21:28 | 只看该作者
[s:103] [s:103] 能否说得在具体一些，还有就是你都注意哪些环节了，哪些是一定没有问题的
天涯苍苍日茫茫，风色萧萧海清凉！潮涨潮落何为是，待到功成再张扬！
回复 引用

TOP

fenghao2006

丑小鸭

Rank: 1

帖子
32 
精华
0 
积分
0 
威望
1 点 
鸭币
251 点 
贡献值
0 点 
讨论指数
0 点 
在线时间
19 小时 
注册时间
2007-12-29 
最后登录
2008-3-18 
3#
发表于 2008-1-6 20:52 | 只看该作者
具体实验步骤是按照分子克隆上的方法做的,具体如下:
制胶:0.75g琼脂糖加36ml DEPC H2O,微波炉溶解后约55度后加入5ml 10乘MOPS和9ml甲醛,振荡均匀后稍冷即倒胶.电泳槽事先处理过.
RNA变性处理:RNA 2.5ul,10乘MOPS 2.0ul,甲醛4.0ul,甲酰胺10.0ul.
65度温育10分钟,后冰上放置10分钟,离心数秒沉于管底.加2.0ul 10乘甲醛凝胶上样缓冲液后,置于冰上.
凝胶预电泳5min(30v),再上样电泳,40v 3小时左右.其中每隔大约1小时更换一次缓冲液.
EB染色10min后紫外灯下观察.
我的RNA 比值为1.84,浓度为8ug/ul.
请大家给我找找原因,为什么跑不出任何条带呢?
做人要知足，做事要知不足，做学问要不知足!
回复 引用

TOP

saturn100

版主

Rank: 7Rank: 7Rank: 7

帖子
1431 
精华
0 
积分
97 
威望
287 点 
鸭币
14864 点 
贡献值
8 点 
讨论指数
0 点 
在线时间
1115 小时 
注册时间
2007-5-21 
最后登录
2009-1-5 
4#
发表于 2008-1-7 19:01 | 只看该作者
[s:94] [s:94] 兄弟做的应该都没有错呀，有点奇怪了，高手来看看吧，呵呵
天涯苍苍日茫茫，风色萧萧海清凉！潮涨潮落何为是，待到功成再张扬！
回复 引用

TOP

fenghao2006

丑小鸭

Rank: 1

帖子
32 
精华
0 
积分
0 
威望
1 点 
鸭币
251 点 
贡献值
0 点 
讨论指数
0 点 
在线时间
19 小时 
注册时间
2007-12-29 
最后登录
2008-3-18 
5#
发表于 2008-1-7 20:25 | 只看该作者
有人说变性电泳中甲醛很重要,而我用的是国产的,会不会跟它有关系啊?
做人要知足，做事要知不足，做学问要不知足!
回复 引用

TOP

返回列表