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质粒PCR

本主题由 saturn100 于 2008-3-26 16:10 设置高亮
fuxingxing

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1# 大 中 小 发表于 2008-3-25 09:05  只看该作者

质粒PCR

目的片段 240 bp,

在质粒ＤＮＡ上有 8 个拷贝，

但我只想要一个拷贝，是用于做融合表达的，两端加了酶切位点,

退火温度为 62 度,

我用６０度退火，７２度延伸，总是得不到 240 bp 的产物,

请高手指点一下!!!

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jenniferli

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2# 大 中 小 发表于 2008-3-25 14:31  只看该作者
建议把其中一个拷贝的区域放宽，PCR先把包含一个拷贝的片断（可以长一点）扩出来，克隆到T载体上，然后再进行单一拷贝的扩增。
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  • saturn100 鸭币 +10 感谢您对鸭绿江的支持 2008-3-26 16:09

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fuxingxing

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3# 大 中 小 发表于 2008-3-26 16:01  只看该作者
多谢您的指导

办法不错

我放弃使用质粒为模板进行PCR

走了另一条路

我找人要了一点心脏的cDNA(我那个基因几乎每个细胞都有)

以此为模板

一放就放出来了
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