小妹最近在分析一个极性高的药物isonicotinic acid, 分析样本为生物检品, 由于药品极性大, 使用传统的C18, phenyl, silica柱其滞留时间均很短, 以至于无法和一些蛋白等杂质良好分离, 最近使用NH2 column总算解决了基质干扰的问题, 但是新的问题来了, 我的样本中同时存在着isoniazid和isonicotinic acid, 在目前的分析条件下, isoniazid有非常严重的拖尾现象, 会干扰isonicotinic acid的定量, 已爬文但找不到适合的解决方法, 恳请各位帮帮忙!!!

分析条件:
NH2 column (4.6 x 25 mm, 5u)
MeOH / NH4HCO2 (50 mM, pH=2.5) = 70/30
Flow rate = 1 mL/min
UV 270 nM
Injection volume : 100 uL

因为isonicotinic acid分析的感度差了点, 我需求的定量浓度大概要100 ng/mL, 所以注射量大了点, 我知道这也是造成isoniazid拖尾的原因之一, 但这点没办法改善, 所以想问问有没有办法从别的地方改善拖尾现象…(isoniazid在检品中浓度约为1 uM)

[ 本帖最后由 star1003 于 2008-10-6 11:29 编辑 ]

几个方法可以试试：
1、流动相中加入少量“三乙胺”试试，看是否可以改善异烟肼的拖尾，不过如果是由于进样量太大而导致色谱柱超载，那这个方法可行性不大。
2、可以在流动相中加入适量“阳离子”表活剂，也就是离子对色谱试剂，如“四丁基溴化铵(流动相PH 6.5）”与异烟酸形成离子对，增加其在色谱柱上保留，提高异烟酸与异烟肼的分离度。
3、也可以在流动相中加入适量“阴离子”表活剂，如“庚烷磺酸钠或十二烷基磺酸钠（流动相PH2.5)”我记得以前做过异烟肼的色谱，加入十二烷基磺酸钠可以增加保留，这样或许你的异烟酸就可以在异烟肼的前面出峰，那就不会因为异烟肼的拖尾而干扰测定啦。

注：以上三种方法最好是在 C18柱上进行测试，如果考虑蛋白等干扰，可以从第二种方法开始试。祝你好运